​ 如何提高染色体小片段平衡易位检出率

林俊伟 | 中山大学附属第三医院产科实验室马美春 | 韶关市第一人民医院检验科染色体平衡易位一般是指两条非同源染色体片段发生相互交换，没有发生遗传物质丢失或增加的情况。一般人群中染色体平衡易位占1.9‰[1]。平衡易位由于没有遗传物质的增减，患者本人并未表现出临床症状，但在生育下一代时候只有1/36配子正常，1/36配子为平衡易位型[2]，其他均为异常配子而导致习惯性流产或者生育出有染色体异常的下一代。染色体核型分析是目前唯一能检出平衡易位的技术金标准，但由于方法局限性，小片段（<10Mb）染色体易位难以识别，导致检出困难，即使是>10Mb的易位也可能由于显带水平，带纹相似等而难以鉴别。但我们可以通过技术方案改进，检测流程改进来提高检出率。染色体的条带水平不高导致分辨率低是一个方法学局限。目前常规染色体分析条带水平在400左右，高分辨技术可以将条带水平提高到500-850水平，属于较高显带水平。如图1中17号染色体，B组为高分辨700显带17q22-24间可分辨出3条深带，相对A组的400显带，B组有更高的分辨率，对小片段异常分析更容易，若将高分辨技术作为常规显带分析技术可提高对微小片段染色体异常检出率，对小片段染色体平衡易位检出率同样适用。目前改良细胞同步化高分辨试剂市售品牌很多，操作也简单，只需在培养过程增加两次添加试剂的步骤。据相关报道改良细胞同步化高分辨技术可收获50%[3]以上550条带核型。随着商品化试剂越来越多，用高分辨技术提高显带水平并不是一件难事，但意义却重大。核型分析是人眼对染色体结构数目异常识别分析，需要丰富阅片经验积累，大量异常核型结果分析总结才能得到提升，一个功底深厚的核型分析员需要两到三年的技术磨炼，只有经过长期经验积累才能练就火眼金睛，对小片段异常方能一眼辨雌雄。培养一个核型分析技术员很重要，长期积累阅片经验更重要。但一个优秀核型分析员只有火眼金睛是不够的，还得有牢固的遗传学基础理论知识支撑，了解各种染色体综合症核型类型，染色体异常多态性临床意义，平衡易位配子遗传规律……核型分析不是给个数据，也不是简单的给个镜下的核型图，需要根据检测结果给出符合染色体病某种综合症类型，需要对染色体异常类型进行分析，包括形成原理，可能导致的临床症状，需进一步的检测方案。这些没有遗传学基础知识做不了，反过来遗传学基础知识，可以让核型分析检测走得更远，分析得更透彻，细致，例如病例分析。病例分析是一个很重要的检验前处理，了解患者病史如孕产史，生殖发育情况，生长发育情况，智力评估情况，直系亲属相关信息等对进行核型分析有很好的指导作用。如临床诊断很符合某一染色体综合征如Turner，Down，Klinfete等，而核型分析初步诊断未见异常的情况下需加大核型计数和分析排除嵌合体或者低比例嵌合体的可能；如临床诊断习惯性流产，应而同时查阅病例中是否有流产组织染色体检查结果（如芯片）或者相关检测信息，这些信息对提高染色体小片段异常检出率非常有用，可以利用流产组织的异常结果来倒推父母可能发生的平衡易位情况。核型分析之前认真阅读病例，带着患者基本信息做核型分析，从遗传规律的角度做思考，不放过任何一个可能性的进行检验，对提高染色体异常检出率很有帮助当然也包括染色体小片段平衡易位检出。同时定期病例总结，特别是异常病例，典型病例，罕见病例的谈论总结，既加深印象，积累经验，提高能力，对整个遗传检测团队都很有帮助。好的技术，好的技术员还要配上好的检验分析流程才算是完美。核型分析是一个体力活，人总有状态不好，眼神迷糊的时候，双线阅片，多层审核可以有效层层把关。双线阅片指同一例样本的染色体片由两个不同技术员进行核型分析，最后将结果汇总比对，当结果不一致情况需要再进一步谈论分析，寻求其他技术复核等。多人审核是指在检验结果发出前需要多层审核，一般需要3人以上由检验者，审核者，审批者进行，人员资质一般由初级职称到高级职称技术员组成。完善严格的操作流程可以提高工作效率，提高异常检测率，提高临床及患者对检测结果信任度。染色体核型分析技术是一个金标准，然而由于方法学局限性存在，很多时候临床有表现但核型分析正常，这时候我们要做的是考虑是否同时选择其他检测手段如QF-PCR，FISH，基因芯片（CMA、SNPArray)，二代测序（医学外显子、全外显子、全基因测序）等技术来进一步检测，弥补核型分析不足，发现核型分析未能发现的问题。【参考文献】[1]夏家辉刘德培.医学遗传学[M].人民卫生出版社:北京,2004:137.[2]王昊.两条染色体平衡易位携带者配子类型的理论分析[J].中国优生与遗传杂志,2011,19(5):1-2.[3]郭莉,何轶群,钟银环,等.改良高分辨G显带技术在复杂染色体重排携带者中的应用[J].热带医学杂志,2019,19(591):594.
（责任编辑：xsq）