新冠病毒核酸PCR检测技术

自2019年12月底以来，新冠病毒感染引起的新冠肺炎疫情在全世界范围内爆发。因为新冠病毒具有较强的传染性，因此能够快速、准确的检测出新冠病毒是阻断疾病传播、防控疫情的关键。目前我们国内已经出现了多种检测新冠病毒的核酸检测方法，其中以pcr技术为主流方法。新冠病毒是一种单链正股RNA病毒，属于冠状病毒科，β病毒属，可以发生人际传播，且传播能力比2003年的“非典”强。主要以接触传播和飞沫传播方式为主。常用的病原体检测方法有病原体培养、血清抗体检测、核酸检测等。病原体培养耗时长、效率低；血清抗体检测特异性低；因此临床上普遍采用耗时短、特异性强、灵敏度更高的核酸检测方法。实时荧光定量PCR：此技术属于二代PCR技术，可对核酸进行定量检测。该方法利用核酸扩增时产生的扩增曲线来判读核酸量。目前主要有两种方法：①荧光染料法、②TaqMan探针法。荧光染料法原理：是在反应体系中加入一种可以和双链核酸非特异性结合的荧光染料，在每一轮循环结束时染料就会结合在扩增产生的双链核酸上，并产生荧光，信号接收器并记录其值。根据荧光信号产生的曲线，并根据设定的荧光阈值和扩增的CT值就可以判断目标核酸的有无。TaqMan探针法原理：在反应体系中加入一种与靶标特异性结合的寡核苷酸探针，其两端分别连接有荧光基团和淬灭基团，两者共存时由于荧光能量共振转移现象，无荧光产生，在扩增延伸过程中，具有外切酶活性的DNA聚合酶会将5’端的荧光基团切割下来，从而产生荧光，信号接收器并记录其值，根据CT值可以判断病毒核酸的有无。新冠病毒核酸是单链RNA，其核酸检测过程中包括逆转录和PCR扩增两个步骤。首先在逆转录酶的作用下病毒RNA被逆转录为cDNA，然后DNA聚合酶再对cDNA进行扩增。然后根据样本扩增曲线来判断结果。
（责任编辑：dawenwu）