无论是临床还是科研,经常在流式细胞仪上获取时会碰到屏幕上空白一片,散点图上没有细胞信号出现。此时,很多人可能会惊慌失措,因为细胞珍贵啊。
这里介绍几个常见原因和解决方法:
1、检查流式细胞仪和电脑的连接
不同类型的流式细胞仪(大多数是老式的),启动电脑或流式细胞仪的顺序有要求的。有些需要先启动流式细胞仪,然后再启动电脑,而有些则需要先启动电脑,再启动流式细胞仪。也有些流式细胞仪无论什么时候启动都没关系。但实际上,流式细胞仪启动后都需要一定时间预热,进行很多设置的初始化,所以如果完全看不到数据,有时候可以试着按照厂家技术手册要求,将电脑和流式细胞仪全部关闭,再依顺序重新启动。
2、压力问题
有些流式细胞仪,例如BD的Calibur、LSRII、Fortessa、Canto等系列流式细胞仪需要给试管加压,才能获取细胞,如果压力不够,可能就获取不到细胞,可按照以下方法解决:
(1)检查液流车是否正常开启,如有压力表看一下压力指示。
(2)在Calibur机器上,如果Run按钮是橙色,而不是绿色,那么就可能是压力问题,需要检查鞘液桶的压力问题。
(3)液路内是否存在空气?这一般都是由于前次获取细胞时将标本取光了,导致液路进来空气,需要进行Degas(排气泡)操作。
3、进样针堵塞
样本中细胞浓度过大,或过于粘稠,很可能导致进样针堵塞。一般都是用不超过10%的次氯酸钠溶液高速跑5~10分钟,如果无效,可考虑试一下热水(但需要先咨询一下技术工程师)。有时候,也可以枪头+注射器,对着进样针进行反冲(但切记,冲压不能太大,否则容易导致内部液路接口脱落)。
4、流式细胞仪设置改变
有时候仪器的设置,例如阈值改变、激光延迟改变,就可能导致取不到细胞,此时需要检查一下配置,并询问一下上次的操作者。
5、激光或检测器问题
激光器或检测器出问题的概率很小,但如果前述问题都不存在,也还是需要考虑的,此时,可咨询厂家技术工程师。
6、低级错误
最夸张的原因,就是没有往试管中加样本,或者错把PBS加成为蒸馏水,导致细胞全部裂掉,或者错加了10×PBS,这些都是非常低级的错误,但谁知道会不会出现呢?
(责任编辑:lgh)