流式细胞术抗体选择及试剂组合方法

一、选择抗体组合的基本原则如下:
1)所选的抗体组合应足够宽,可以鉴别样本中的所有细胞亚群包括正常和异常群体。抗体的数量越多,检测的灵敏度越高。应该指出,由于肿瘤细胞常常缺少细胞的正常标记或表达异常,所以特异性抗体一定程度上的重复选择有时是必要的。
2)抗体的选择应可以区分正常和异常细胞,正常细胞可作为实验的内参 照,异常细胞的表达比例也更准确。如现在用CD45抗体来区分正常和幼稚细胞,此方法尤其在幼稚细胞含量少时更显优势。
3)荧光强度和表位密度应同时考虑。对表达少的抗原表位应尽可能选择强度强的荧光素。
4)必要时用活性检测排除死细胞较强的非特异性染色。国外统计,约70%组织样本和48%血或骨髓标本有活性检测结果。
5)实验人员应了解所用抗体的反应细胞谱,以及与特定荧光素结合后的染色模式。相同的CD编号的不同抗体可能有不同的结合模式。

二、常用的方案考虑:
1. 大而全的抗体组合:全面了解抗原表达,无需额外染色,省时但费用高。
2. 先用筛查试剂了解样本的一般情况,再根据所得信息采用第二线特异性更高的抗体组。经济,但费时,也需要正确的抗体选择的策略性决定。但考虑到所用时间和设备费用,只有约30%国外实验室采用此法。

3. 基于临床或形态学的资料,选用有目标性的抗体组合以确认可疑的诊断或分类。

三、筛查试剂组合:

用较少的一组抗体来鉴定样本中的主要细胞群体(如淋巴、粒、单核、红细胞、浆细胞、幼稚细胞等)。可包括一个全T和全B抗体,粒细胞和单核细胞抗体,CD45或CD38抗体以区分其他细胞群体。或通过检测胞内特征性的抗原(如cCD3, cCD22,cMPO)来初步分类。
在某些较难判断的疑难病例上,胞内抗原的检测可能有重要的价值。

(责任编辑:lgh)

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