聊聊基因重排检测那些事

随着科学技术手段的进步，以及人们对疾病的认识程度加深，一些新的检测手段在疾病诊断和治疗中发挥越来越重要的作用，基因重排检测作为分子领域的一个新生军，被广泛应用于临床。本文就基因重排的一些基本知识、在淋巴与造血疾病诊断和治疗中的临床应用做简单介绍。［何谓基因重排］机体内，每个淋巴细胞的重排基因都是独特的，因此T淋巴细胞和B淋巴细胞才能辨别出各种不同的抗原。如果机体在某些不良因素的刺激下，失去对某个基因重排细胞的控制，则该细胞就会出现不可控制性、单克隆性的增生，最终导致淋巴瘤的发生。理解淋巴细胞的基因重排，首先要了解其发育过程。众所周知，淋巴细胞分T、B、NK三类细胞：NK细胞没有基因重排过程；对B细胞而言，发育过程相对简单，不做过多赘述；T细胞的分化发育过程相对较复杂：由骨髓中的干细胞分化发育而来，经历前胸腺、胸腺皮质、胸腺髓质，最终到达外周淋巴组织和血液。                          正常淋巴细胞发育过程呈现多样的重排形式，即多克隆性；而在肿瘤状态下，呈现单克隆的重排形式。                                                                       ［基因重排检测方法］目前，临床上对于重排检测的应用主要在：疾病的辅助诊断与鉴别诊断、治疗后微小残留病（MRD）的监测两方面，市场上有相对应的产品试剂盒。应用于疾病辅助诊断与鉴别诊断，主要应用毛细管电泳方法；而治疗后MRD的监测主要采用二代测序（NGS）的方法。回顾基因重排检测的发展过程：“金标准”是 Southern blot 法，但该方法需要提取大量高质量的 DNA 分子，并且石蜡包埋标本中 DNA 分子降解成小片段，限制该方法的广泛应用；而后续的PCR技术衍生的方法具有高效、快速等优点，同时对样本 DNA 的质量和数量要求相对较低(也可以采用10%中性福尔马林固定的穿刺石蜡包埋标本)，所以临床应用非常广泛。总之，无论采用哪一种分析方法， 基因重排结果判断必需结合形态学特征、免疫表型特点和临床特征，这样才能更准确的对淋巴瘤进行诊断和分类。［基因重排在临床上的应用］随着淋巴与造血疾病WHO分类标准的不断更新，血液病的综合诊断越来越重要。精准诊断已是淋巴瘤诊断的必备。基因重排检测在淋巴瘤的精准诊断中具有重要的临床价值。应用基因重排检测这一手段，应注意以下几个问题：第一，注意谱系失真或混乱现象：少数情况下，在Ｂ细胞淋巴瘤中可发生TCR基因重排，而在Ｔ细胞淋巴瘤中也可发生Ig基因重排。多见于起源于前B、前T细胞的淋巴瘤／白血病，起源于成熟淋巴细胞的肿瘤则少见。第二，B/T淋巴细胞受体基因重排与肿瘤的发生是２个独立过程，单克隆性增殖并非完全等同于恶性疾病，也可以出现在某些病毒感染（如EB、HCV、HIV等）、自身免疫性疾病、骨髓移植或化疗后的患者，另外正常老年人也可因TCR库多样性衰竭而呈单克隆性重排。但通常情况下，淋巴组织良性增殖，常表现为抗原受体基因重排的多克隆性，但也不能完全排除一些特殊情况。（图片来源：Hematopathology）第三，注意某些与临床不符的分析思路。比如对于部分骨髓仍有浸润的患者（≥５％），但是送检组织中没能检测到单克隆基因重排，可能的原因有：肿瘤基因处于 胚 系 基 因 状 态，尚 未 发 生Ig/TCR重 排；引物代表性差和体细胞高频突变；标本取材不佳或肿瘤负荷低等等。［总结］淋巴与造血组织疾病中，淋巴瘤的诊断是难点，在某些形态学难以明确诊断的情况下，应用基因重排检测手段，可以使我们打破“一头雾水”，变得“柳暗花明”。因此，我们在淋巴瘤诊断和治疗后MRD监测方面，要善于应用基因重排检测这一有效工具。同时也应做好标本的处理和上机检测环节，准确分析其检测结果，并综合考虑形态学、免疫表型、临床特点、生物学行为等等。 ［参考文献］［1］肖颖，熊婕，曹阳，周剑峰，邓金牛.Ig/TCR基因重排检测在淋巴系统恶性增殖性疾病诊断及疗效监控中的意义［J］.临床血液学杂志，2015,28（3）:24-208.［2］贾雯，马小兵.TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用［J］.临床与病理杂志，2014,34（5）:636-642.［3］潘鑫艳，杨长绍，黎贵芸，杨举伦，王丽.T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用［J］.临床与实验病理学杂志，2015,31（4）:400-403.［4］程凤凤，房爱菊，孙琳，于静，张晓莹，戴永刚，刘新风.毛细管电泳技术在T细胞淋巴瘤诊断中的应用［J］. 中华肿瘤防治杂志，2017,24（12）：858-861.［5］蔡四忠.探讨恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理检测［J］.中国医药指南杂志（临床研究），2019,17（5）:57-58.［6］Monika Brüggemann，Michaela Kotrová，Henrik Knecht等.Standardized next-generation sequencing of immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations for MRD marker identification in acute lymphoblastic leukaemia; a EuroClonality-NGS validation study［J］.Cancer，2019，19（11）:352-359.   
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