荧光原位杂交(FISH)之二 实验用具、材料及相关溶液的配制

实验用具及材料

相关溶液的配制

1)20×SSC:175.3g NaCl,88.2g柠檬酸钠,加水至1000mL(用10mol/L NaOH调pH 至7.0)。

2)去离子甲酰胺(DF):将10g混合床离子交换树脂加入100mL甲酰胺中。电磁搅拌30min,用Whatman l号滤纸滤。

3)体积分数70%甲酰胺/2×SSC:35mL甲酰胺,5mL 20×SSC,10mL水。

4)体积分数50%甲酰胺/2×SSC:100mL甲酰胺,20mL 20×SSC,80mL水。

5)体积分数50%硫酸葡聚糖(DS):65oC水浴中融化,4oC或-20oC保存。

6)杂交液:8µL体积分数25%DS,20µL 20×SSC混合。(或40µL体积分数50%DS,20µL 20×SSC,40µL ddH2O混合)取上述混合液50µL,与5µL DF混合即成。其终浓度为体积分数10%DS,2×SSC,体积分数50%DF。

7)PI/antifade溶液

PI原液:先以双蒸水配置溶液,浓度为100µg/mL,取出1mL,加39mL双蒸水,使终浓度为2.5µg/mL。Antifade原液:以PBS缓冲液配制该溶液,使其浓度为10mg/mL,用0.5mmol/L的NaHCO3调pH值为8.0。取上述溶液1mL,加9mL甘油,混匀。

PI/antifade溶液:PI与antifade原液按体积比1:9比例充分混匀,-20oC保存备用。

8)DAPI/antifade溶液:用去离子水配制1mL/mg DAPI储存液,按体积比1:300,以antifade溶液稀释成工作液。

9)封闭液I:体积分数5%BSA 3mL,20×SSC 1mL,ddH2O 1mL,Tween20 5µL混合。

10)封闭液II:体积分数5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,goat serum 250µL,ddH2O 750µL,Tween20 5µL混合。

11)荧光检测试剂稀释液:体积分数5% BSA 1mL,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,Tween20 5µL混合。

12)洗脱液:100mL 20×SSC,加水至500mL,加Tween20 500µL。

(责任编辑:sgx)

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