质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景

自20世纪80 年代起,质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用,其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术已经进入临床微生物实验室用于病原菌鉴定,与传统的表型鉴定及分子生物学技术相比,质谱仪快速、准确、成本低廉。

    目前的应用前景:
       
    传统的细菌鉴定流程通常是:根据细菌在不同培养基上的生长情况和菌落形态,应用一些简便、快速的试验如革兰染色、触酶、氧化酶等进行初步分类,然后通过手工生化试验或自动鉴定系统等来完成鉴定。虽然有些试验几分钟即可完成,但大部分情况下,完成常规细菌鉴定至少需
要8~12h或更长的时间。分子生物学如聚合酶链反应、DAN芯片、微阵列技术等方法虽然敏感性高,但费用高昂,且对操作人员、设备和环境有较严格的要求,不适合常规应用。质谱仪是将完整的病原菌细胞直接进行检测,无需蛋白提纯,样本准备很简便。许多研究表明,质谱仪敏感性很高,可以区分表型相似甚至相同的菌株,提供属、种、型水平的鉴定。

    目前报道使用质谱进行微生物鉴定方面的问题主要集中在质谱数据库容量和有些特定种属无法明确区分上。

    MALDI-TOF MS 未来的发展方向
       
    近年来,越来越多的临床微生物实验室开始引入质谱仪进行常规样本的细菌和真菌鉴定,随着研究的不断深入,质谱仪的应用领域也将变得越来越广泛,主要有3 个方面:在流行病学中的应用、从患者样本中直接检测病原菌和对耐药机制的检测。

    (一)流行病学
     
    微生物实验室、感染控制人员和临床医师面临的挑战之一是在某个临床菌株暴发流行时可以得到菌株代表分类的特异数据,如沙门菌、链球菌等,为了准确得到血清型、亚型或其它分类,实验室必须耗费更多的时间做进一步检测,而且许多菌株分型需要特殊的试验方法、仪器、耗材等。因此,条件有限的实验室就需要外送做检测,可能导致检测时间延长、丢失重要的流行病学数据、增加检测费用、结果不准确等。

    将来可能出现更加精密的仪器,不但可以鉴定病原菌,同时可以快速、准确地提供菌株的流行病学数据,这将使临床微生物实验室在医院感染控制、病原菌暴发、耐药菌国家监测及生物防御等领域扮演重要角色。

    (二)MALDI-TOF MS直接从患者样本鉴定细菌因为不需要对目标物质进行扩增以及其鉴定病原菌的高敏感性,MALDI-TOF MS直接从样本中检测细菌的能力可能取代PCR。通过对这些患者样本处理方法的改良,主要包括去除蛋白、核酸、细胞碎片等可以影响分析的组分,MALDI-TOF MS直接从样本中进行细菌鉴定的能力会进一步提高。

    (三)耐药性检测

    微生物实验室不但要提供精确的病原菌鉴定结果,同时还要检测其敏感性,为临床医生提供治疗依据。常规的药物敏感性试验方法比较费时,

    一些酶联免疫、凝集等方法只能局限于少数细菌。MALDI-TOF MS可为耐药基因检测提供一个很好的平台,可以分析几乎所有的耐药机制,目前报道的方法主要基于下列几种原理:分析抗菌药物及被修饰后的产物;分析细胞组分;分析核糖体DNA 甲基化;检测突变等。
(责任编辑:zqg)

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