革兰氏染液，瑞氏染液和美兰染液是我们临床检验工作中最常用到的三种染色液。针对不同的染色对象，施以不同的染色方法，以达到检出致病的真凶，这是对一个检验工作者最基本的要求。
在临床工作中，我们经常遇到需要查找的G-双球菌的医嘱，标本往往是男性尿道分泌、女性宫颈分泌物居多，新生儿的眼部分泌物也有，但比较少见。以前在课堂里听老师讲淋球菌有哪些特点，可是那些都是书本的文字描述，没有真正看到临床的具体表现。老师给我们的看的标本又是经过纯培养的细菌株，形态比较典型。而现实临床中的标本则千差万别，需要一个好的染色方法帮我们来辨认。
观察G-双球菌的形态往往用革兰氏染色法，淋球菌经革兰氏染色是红色双球菌，呈卵圆形、肾形或豆形，两个凹面相对，大小一致，无鞭毛、无荚膜、不形成芽孢，在脓液中成对排列于脓细胞（多核白细胞）的胞浆内或其外围。
自己在工作中依然遵循当年老师的教导，拿到分泌物标本时，在不染色情况下先在镜下观整张片子的大致情况，比如有无白细胞或脓细胞，多或少，这样一来自己心里有底。然后进行革兰氏染色，通过显微镜寻找白细胞内外的G-双球菌，这也是分泌物查找G-双球菌的标准程序。但如果用革兰氏染液以外的其他染色液对分泌物进行染色，效果如何呢？今天就给大家展示一下分泌物经三种不同染色的效果：
1. 革兰氏染色
这下面两幅图是男性尿道分泌物经革兰氏染色后的图，我们可以看到，在脓细胞或白细胞内可以见到呈卵圆形、肾形或豆形阴性双球菌。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，其染色原理是：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
图1. 经革兰氏染色的G-双球菌
2. 瑞氏染色
下面两张图都是瑞氏染色的尿道分泌物，是不是觉得它们的背景也是干净清晰，细胞内同样发现有呈卵圆形、肾形或豆形细菌，这些细菌到底是不是G-双球菌呢？答案是肯定的。因为这是同一个病人的标本进行两种染色法，一种是革兰氏染色，另一种则是瑞氏染色。
瑞氏染色液是细胞染色的好帮手，是我们检验染色中使用频率最高的一种染色液。瑞氏染色液由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成，将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形态。
其染色原理是：既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。而对细菌呢，瑞氏染液则将它们全都染成蓝色，没有像细胞那样多姿多彩，给我们呈一片多彩的细胞世界。
图2. 经瑞氏染色的G-双球菌
3. 碱性美蓝染液
下面两张图这些星星点点的东西是不是很眼熟啊。又是在细胞内的，卵圆形、肾型或豆形，还成对，不会这样巧合吧。通过图片，我们可以看出，整个图片的背景除了细胞外，就只有一种细菌，给人一个干净、清晰的感觉。我们很容易找到细胞内染成蓝色的呈卵圆形、肾形或豆形细菌。对，这就是G-双球菌。
图3. 经碱性美蓝染色的G-双球菌
4. 总 结
通过以上三种染色的对比可以看出，经革兰氏染液后的涂片的背景是粉红色，经瑞氏染色染色液后的涂片的背景是有红有蓝的，而经美兰染色液后的涂片的背景则是蓝色。背景的颜色变化了，但是丝毫没有影响我们在细胞内找到呈卵圆形、肾形或豆形细菌。不但不影响，反倒是让我们又多了一种选择，那就是我们知道可以用瑞氏染色液在分泌物涂片中找G-双球菌。因为在我们临床实际检验中，瑞氏染液是我们使用频率最高的染色液，就连最基层的检验科都在用它。
在我们临床检验实际工作中，我们就是利用感染G-双球菌的分泌物背景干净，没有其它的杂菌的这一特点以及经染色后的细菌形态作出判断。其中革兰氏染色和美兰染色是我们操作指导明确规定的方法。而瑞氏则没有，但是个人认为，瑞氏染色液是由酸性伊红和碱性的美兰组成的复合物，而美兰染色又是操作指导中明确规定的操作的染色物质。基于瑞氏染色液的组成成分，所以个人认为，瑞氏也可以用于染分泌物找G-双球菌。
在实际工作中只要我们平时多多用心观察，多看书和体会书本上的内容，多动手做几种不同的染色，我们就不难撑握其中的特点特性，这不仅能提高我们的检验水平，也能更好地服务临床。
（责任编辑：lgh）
