VASP（血管扩张刺激磷酸蛋白）是一种血小板胞内蛋白，是ADP（二磷酸腺苷）引起的血小板聚集反应信息传递途径中的重要环节。
抗血栓药物氯吡格雷（波立维），可特异性阻断ADP与血小板P2Y12受体的结合，促进VASP磷酸化，从而抑制血小板聚集。部分冠心病患者存在对氯吡格雷的抵抗性，导致抗血栓治疗失败，引发临床不良事件，因此对氯吡格雷抵抗性的监测至关重要。
根据2006年Michelson在欧洲心脏病杂志的建议，对氯吡格雷抵抗性的监测首选VASP磷酸化检测（流式细胞术）。
【实验原理】
VASP磷酸化受cAMP (环磷酸腺苷) 级联调节。前列腺素E1（PGE1）会激活级联反应，而ADP可通过P2Y12受体抑制该级联调节。
在检测时，VASP的磷酸化形式对应P2Y12受体抑制状态，而VASP的非磷酸化形式对应P2Y12受体激活状态。PGE1激活的同时加入ADP，VASP维持磷酸化的程度即可反映P2Y12受体抑制的程度。因而该实验可用于氯吡格雷用药后的药效评估和监测。
【实验方法】
血液样本首先和试剂 PGE1 或PGE1+ADP一起孵育。细胞破膜后，血小板内磷酸化的VASP被一种特异性单克隆抗体识别，再通过间接免疫荧光方法（非洗脱）标记抗体。血小板通过第二荧光标记的CD61抗体进行识别。
使用流式细胞术分析单独PGE1激活管、PGE1联合ADP处理管、以及同型对照管的荧光强度均值（Gmean，几何均值），计算血小板反应指数（Platelet reactivity index，PRI）。
【试剂】
PGE1，ADP，
抗VASP-P小鼠单抗，同型对照（小鼠IgG1）
FITC 标记抗小鼠IgG多抗，PE标记CD61单抗
破膜剂、固定液、缓冲液
【样本制备】
1 每样本准备3试管，试管1加入10μL PGE1试剂；试管2和3均加10μL PGE1+ADP试剂；各管均加10μL全血，低速涡旋后室温孵育10分钟；
2 各管均加10μL固定液，低速涡旋后室温孵育5分钟；
3 试管1和2均加10μL破膜剂和抗VASP-P小鼠单抗；试管3加10μL破膜剂和同型对照；低速涡旋后室温孵育5分钟；
4 各管均加10μL破膜剂、FITC标记抗小鼠IgG多抗、PE标记CD61单抗，低速涡旋后室温避光孵育5分钟；
5 加入2mL稀释液，2小时内在BriCyte E6流式细胞仪上测定。
【数据分析】
采用BriCyte E6流式细胞仪配套MRFlow软件进行数据分析。
1 建FSC（LOG） / SSC（LOG）散点图，排除白细胞干扰，设门选取含血小板的细胞群（A）；
2 建FITC（LOG）/ PE（LOG）散点图，对A门内细胞进行分析；设门选取PE阳性细胞群（B），记录该群细胞FITC方向的Gmean值；
3 依次分析试管1、2、3，计算血小板反应指数
血小板反应指数（PRI）=（Gmean 试管1 – Gmean 试管2）/（Gmean 试管1 – Gmean 试管3）×100%
【图形及结果】
血小板反应指数（PRI）= 17.5%
（责任编辑：lgh）
