DNA倍体分析是流式细胞术最为经典的应用之一，在肿瘤临床领域的贡献无可替代。DNA含量的异常变化、非整倍体细胞的出现，往往预示着恶性肿瘤的产生。应用流式细胞术进行细胞周期和DNA倍体分析，对肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、预后和疗效评价具有重要价值。
【实验原理】
完整细胞周期可分为G0、G1、S、G2、M期。其中G0、G1期细胞DNA含量为较恒定的2N，即二倍体（diploid）；S期细胞DNA含量逐渐从2N向4N增加；G2、M期细胞DNA含量为恒定的4N，即四倍体（tetraploid）。
荧光染料PI与细胞DNA分子特异性结合， PI的结合量与细胞DNA含量成正比。流式细胞仪荧光强度（A），与PI的结合量线性相关。通过测定PI通道荧光强度（A），可对DNA周期和倍性进行分析。
【实验方法】
采用合适方法制备单细胞悬液，使用核糖核酸酶（RNase）去除RNA干扰后，进行PI 荧光染色，在流式细胞仪FL2通道（580~650nm）进行检测。
【试剂】
碘化丙啶（PI），胰蛋白酶（trypsin），核糖核酸酶（RNase）
70%冰乙醇，磷酸盐缓冲液（PBS）
【样本制备】
以培养细胞为例：
1. 弃去液体培养基，加入适量胰蛋白酶消化细胞，37℃，3~5分钟，离心洗涤2次，加入70%冰乙醇固定，0～4℃保存备用。
2. 将70%冰乙醇固定的单细胞悬液离心，PBS洗涤2次后，弃上清，PBS重悬底部细胞。
3. 向细胞悬液中加入200μL RNase溶液，室温孵育20min。
4. 向细胞悬液中加入200μL PI染液，4℃避光染色20min，2小时内进行流式细胞仪测定。
【数据分析】
采用BriCyte E6流式细胞仪配套MRFlow软件进行数据分析。
1. 建FSC / SSC散点图，排除碎片及杂质，设门选取待测细胞，命名为“细胞群”。
2. 建PI-W / PI-A散点图，显示“细胞群”；设门选取单个细胞（排除粘联体），命名为“单细胞群”。
3. 建PI-A直方图，显示“单细胞群”，设区间门依次选取“G0/G1期”细胞、“G2/M期”细胞，统计各群细胞比例及平均荧光强度。
【图形及结果】
（责任编辑：lgh）
