巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)可感染人群广泛，尤其对婴幼儿危害更为严重，会导致新生儿先天畸形、智力低下等后果。在感染早期进行特异性的抗病毒治疗能够有效提高治愈率，减少并发症及死亡率。所以，有效预防和降低严重的CMV疾病的发生，关键是运用早期、快速、准确的检测方法。
pp65抗原是活动性CMV感染时外周血白细胞中出现的主要抗原，是目前临床公认CMV活动性感染指标之一。传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光，操作步骤多，整个实验需要6个多小时，而且只能定性。流式法检测人外周血白细胞中CMVpp65抗原阳性细胞，操作步骤明显简便，耗时大约2h即可完成检测，并可定量检测CMVpp65抗原阳性细胞，且已被大量实验证实具有很好的临床应用前景[1-3]。
【实验原理】
pp65抗原（phosphoprotein 65 antigen,pp65）是CMV被膜蛋白，位于病毒的衣壳和其包膜之间，属于低基质磷酸化蛋白，分子量为65kD，占病毒总蛋白的15%。是CMV感染时外周血白细胞中出现的主要抗原，病毒活跃期时含量明显增加。
将白细胞中pp65抗原进行单克隆抗体标记和荧光标记，用流式细胞仪进行检测。pp65抗原的荧光强度与阳性细胞数呈正相关，从而达到对pp65抗原的定量分析。
【试剂】
CMVpp65单抗、同型对照（鼠IgG1）
FITC标记的IgG二抗
溶血剂、破膜剂、缓冲液
【样本制备】
1.取两支试管标记为测试管和同型对照管，分别加入抗凝全血100μL，经溶血、破膜处理后制成细胞悬液；
2.测试管中加入CMVpp65单抗，同型对照管中加入同型对照IgG1；避光孵育20min后，离心，弃上清；
3.每管加入FITC标记的二抗，避光孵育20min后，离心，弃上清；
4.加入一定量PBS重悬细胞，使用BriCyte E6流式细胞仪测定。
【数据分析】
1.采用BriCyte E6流式细胞仪配套MRFlow软件进行数据获取，分析白细胞包括单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞，MNC）和多形核白细胞（PMNL），计算pp65阳性细胞百分数。
2.建立FSC/SSC散点图，设门圈出MNC和PMNL细胞；
3.分别建立MNC和PMNL细胞在FITC方向直方图，根据阴性细胞区域确定I1、I2门位置；
4.分别计算MNC和PMNL细胞的CMVpp65阳性率；
CMVpp65阳性率=测试管I1/I2门内百分比-同型对照管I1/I2门内百分比；
CMVpp65阳性率＞5%可判定为阳性。
【图形及结果】
（责任编辑：lgh）
