包装规格：100u 活性浓度：3u/ul配套试剂：10×Reaction Buffer (Mgcl2-Free)；Mgcl2 Solution(25mM)；产品概述：Thermus Aquaticus DNA聚合酶（Taq DNA Polymerase）是一个热稳定酶，它可以在74℃复制DNA，经95℃保温仍具有活性。这一未经修饰的酶的分子量为94kD。该酶主要用于DNA PCR扩增而不能用于DNA序列分析。来源：Thermus Aquaticus YT1单位定义：在74℃反应温度条件下，在30分钟内将10nmole的dNTP转化为三氯乙酸不溶物所需的酶量为一单位。50ul反应体系为：50mM Tris-HCl，PH 9.0(25℃)，50mM NaCl，5mM MgCl2，200uM dATP、dCTP、dGTP和H3-dTTP，12.5ug活化的小牛胸腺DNA。10×反应缓冲液（15mM MgCl2）：500mM KCl，100mM Tris-HCl（PH 9.0 at 25℃），1.0% Triton X-100，15mM MgCl2。10×反应缓冲液（MgCl2-Free）：500mM KCl，100mM Tris-HCl（PH 9.0 at 25℃），1.0% Triton X-100，25mM MgCl2 Solution单独包装。储藏缓冲液：50mM Tris-HCl（PH 8.0），100mM NaCl，0.1mM EDTA，1mM DDT，1% Triton X-100，50%（V/V）甘油。储存条件：Taq DNA聚合酶必须在-20℃储存并避免反得冻融；10×反应缓冲液和MgCl2溶液应在-20℃进行长期储存或在4℃进行短期保存。使用说明：1． 必要时将酶的包装管进行短暂的离心，以保证包装量的符合。2． 将10×反应缓冲液（15mM MgCl2）按1：10稀释可得到1×反应缓冲液（50mM KCl，10mM Tris-HCl（PH 9.0 at 25℃）， 0.1% Triton X-100，1.5mM MgCl2。1×反应缓冲液（1.5mM MgCl2）适用的四种dNTP终浓度分别为0.2mM。3． Taq DNA聚合酶的过消化（overdigest）测定指标：在规定反应条件下（50ul反应体积，1×内切酶缓冲液F，0.1mg/ml Acetylated BSA，1ug Lambda DNA或1ug Plasmid DNA，74℃，消化16h）的反应产物，经琼脂糖凝胶/溴化乙锭电泳后得到清晰和完整DNA带型的最大Taq DNA聚合酶单位数。4． Taq DNA聚合酶的纯度测定指标：用12% SDS-PAGE测定Taq DNA聚合酶的蛋白条带所占的百分比。5． 用10×反应缓冲液（不含MgCl2）和MgCl2溶液（25mM）建立标准的PCR反应体系（50ul，MgCl2终浓度1.5mM）10×反应缓冲液（不含MgCl2） 5ul MgCl2溶液（25mM） 3ul4×dNTP混合物（每种2.5mM） 4ul①Primer（上游） 12.5-25pmoles②Primer（下游） 12.5-25pmolesDNA模板 1×10-3pmoles③无菌去离子水 —Taq DNA聚合酶 2-3u 总体积50ul①【每种dNTP终浓度=0.2mM】②【1OD260引物（20mer）≈5pmole/ul】【1OD260引物（40mer）≈2.5pmole/ul】③【1pmole双链DNA（1000bp）≈0.66ug】【1pmole双链DNA（2000bp）≈1.32ug】1.5mM的MgCl2终浓度并不能保证所有的PCR引物获得理想的扩增产量及扩增特异性，一般除调整PCR循环参数外，还需要使用10×反应缓冲液（不含MgCl2）和MgCl2溶液（25mM）来调整PCR反应的Mg2+终浓度，如下表：
10×反应缓冲液（不含MgCl2）（ul）
5
5
5
5
MgCl2溶液（25mM）（ul）
2
3
4
5
其他组分（ul）
43
42
41
40
PCR反应总体积（ul）
50
50
50
50
PCR反应MgCl2终浓度（mM）
1
1.5
2
2.5
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