2018年5月10日，国家卫生健康委发布《关于持续做好抗菌药物临床应用管理有关工作的通知》，要求进一步加强抗菌药物临床应用管理，并重点管控儿童抗生素滥用。例如：研究建立针对儿童的监测体系；建立儿童医院门急诊和住院抗菌药物使用监控制度等。
关于抗生素滥用给人类特别是儿童带来的危害已是一个老生常谈的问题。2015年，复旦大学公共卫生学院历经1年，通过对上海、江苏和浙江的1000多名8到11岁的学校儿童人群尿中抗生素的生物监测，证实江浙沪儿童普遍暴露于多种抗生素，背负沉重的抗生素负担。此外，该研究还从儿童体内检测出临床已经停用多年、但在环境和食品中经常发现的抗生素含量。
滥用抗生素带来的最大危害便是细菌耐药性不断增强。世界著名学术期刊《Science》杂志在“细菌的反击”一文中曾这样描述：1943年青霉素大规模使用，1945年院内感染的20%金黄色葡球菌对其产生抗性；1947年链霉菌素上市，同年该药耐药菌出现；1952年四环菌素上市，1956年其耐药菌出现；1959年甲氧西林上市，1961年其耐药菌出现；1964年头孢噻吩上市，1966年其耐药菌出现；1967年庆大霉素上市，1970年其耐药菌出现；1981年头孢噻肟上市，1983年其耐药菌出现；1996年，发现万古霉素耐药菌；2001年利奈唑胺上市，2002年其耐药菌出现。除了耐药性问题，对于儿童，滥用抗生素还会导致过敏、耳聋，有些抗生素还会对骨骼发育起到抑制作用。
为了更好地控制抗生素使用，对其进行有效的检测、监控便显得至关重要。本文介绍了一种简单快捷的前处理方法，结合沃特世液质联用技术，可对人血清中常见的不同类型的抗生素进行同时处理并检测。其中包括：青霉素类（青霉素，阿莫西林，氨苄西林，苯唑西林），四环素类（四环素，金霉素，土霉素），喹诺酮类（左氧氟沙星，环丙沙星，诺氟沙星），磺胺类（磺胺吡啶，磺胺嘧啶，磺胺噻唑，磺胺二甲嘧啶），头孢类（头孢噻肟，头孢噻吩），林可霉素和氯霉素，共7类18种抗生素。
前处理方法：
使用Oasis HLB µElution plate 30 µm对血清样品进行前处理，具体步骤如下：
-Oasis HLB µElution plate活化：取200 µL甲醇加入Oasis HLB µEluting Plate小孔，负压抽滤；用200 µL超纯水冲洗并抽滤两次；废液遗弃。
-样品准备：取120 µL血清样品，加入120 µL 磷酸溶液(4%)，涡旋混匀1 min。
-上样：取上述溶液200 µL(相当于100 µL血清样品)，加入Oasis HLB µEluting Plate，负压抽滤，废液遗弃。冲洗：加入100 µL 超纯水冲洗并抽滤，之后重复冲洗抽滤一次，废液遗弃。
-洗脱：加入50 µL 60%乙腈洗脱并抽滤，之后重复洗脱抽滤一次；用96孔板合并收集洗脱步骤的两次洗脱液。
-进样：上述洗脱液直接进样，进样量5 µL。
实验部分：
-液相条件
表1. 流动相洗脱程序
-质谱条件
MRM离子对信息
实验结果：
标准工作曲线最低点各化合物的色谱图
标准工作曲线线性与加标回收率考察
标准曲线和回收率样品是通过前加标的方式，将标准溶液1:20加入到空白血清中，按照前面描述的血清样品前处理方法进行化合物提取，并上样分析；线性浓度范围根据实际应用需要设定。
用于回收率计算的样品平行处理4份，分别记为I，II，III和IV；-：结果异常，不参与计算。
总结与讨论：
不同种类的抗生素具有不同的性质，在食品安全检测中，各类抗生素由于自身化学性质的差异较大，分别有各自不同的提取方法和流程，血清中抗生素的提取方法也鲜有提及，故建立能同时提取不同种类的抗生素的前处理方法成为本实验的一个难点；
每份血清样本能提供的量只有200 µL左右，远远小于食品安全检测中每个样本可用的基质量(数克)，因此很难通过前处理对抗生素浓度进行浓缩，低含量的抗生素的检测方法成为本实验的第二个难点。
本实验通过沃特世的Oasis HLB µElution plate 30 µm对血清样品进行处理，一次前处理，解决了不同种类的抗生素在血清中的提取回收问题，使不同类型的抗生素的同时检测成为可能。
在前处理过程中，血清中添加磷酸溶液(4%)是为了克服四环素类的蛋白结合，提高其回收效率。同时，在短时间内即通过冲洗(前处理步骤4)，去除磷酸，不会对酸不稳定的青霉素类的回收产生影响。
在SPE plate 选择过程中，曾尝试用Oasis prime HLB µElution plate 30 µm来进行保留-提取，但是青霉素类在该种SPE板上无法很好的保留，导致青霉素类回收率极低，而Oasis HLB µElution plate 30 µm对所列各种抗生素均具有一定的保留能力，利用保留-洗脱机制，在基质量较少且无法稀释处理的情况下，可以将样品进行较好的净化。
根据回收率的CV值可见，该前处理方法稳定可重现，血清中的多种不同类型的抗生素皆可以达到90%以上的回收率，数据稳定重现，样品前处理方法简便快速，显著提高了工作效率。
（责任编辑：陈雪礼）
