近期有用户（love is song）咨询，“生化定标回测值不好”，首先对用户表示非常抱歉，没有能及时回复（微信公众平台信息超过48小时就不能回复）。所以专门推送一期基础内容，包含以下方面：
什么叫定标（校准）
什么叫定标回测
如何去判断定标结果好与坏
定标回测不好影响因素
1、定标
生化仪测定原理是朗伯比尔定律，样本+试剂进行反应，测得的是吸光度（A），需要转化成浓度（或者活力单位）才有临床意义。因此需要建立浓度（或活力单位）和吸光度之间的关系。定标，即测定已知浓度（或活力单位）的校准品，根据生化仪测得的吸光度，进行拟合，得到浓度和吸光度之间的关系曲线—校准曲线（图1日立008as校准曲线），将样本+试剂反应的吸光度带入校准曲线，就可以得到浓度。
图1 日立008as校准曲线
2、定标回测
把校准品当成标本进行测定，计算实测浓度与校准品浓度（厂家通过溯源链赋值）之间偏差。偏差越小，一般可认为校准曲线拟合较好。
3、如何判断定标结果好与坏
首先要看懂定标结果（例如下图为日立008as校准结果）
图2 日立008as定标结果
主要通过以下几个方面
校准品吸光度重复性
日立生化仪每个校准品测定2次，如上图，S1-S6表示第一个校准品到第六个校准品，每个校准品下面对应四个吸光度，第一列和第二列表示重复两次，第一行是计算吸光度，第二行是主波长吸光度），取第一行计算吸光度均值进行拟合，如果两次测定吸光度重复性差，则会影响拟合结果。如图3，样品浓度为校准品S5附近时，测定结果将不准确。
图3 校准曲线
2. 校准曲线参数
查看上一次校准曲线参数S1ABS和K值，如果差异较大，则需要查找原因。对于日立生化仪，如果K值与上次相比，大于±20%，在校准结果下面会显示报警信息。
3. SD值
SD（查看图2校准结果）表示拟合程度，如果所有点均在校准曲线上，则SD小，拟合较好（参考图1），不在校准曲线上的点越多，且偏离曲线越远，则SD越大，拟合不好，影响测定结果。
4. 定标回测
个人认为，如果校准方式为线性（2点线性），则没有必要做校准回测，只需要查看定标结果重复性即可，对于非线性校准，通过定标回测可判断校准曲线拟合程度。如图4，由于校准品前四个点均不在校准曲线上，说明拟合较差，做定标回测，确认校准品回测浓度是否在校准品说明书标注测不确定度范围内。
图4 校准曲线
5. 校准追踪
通过校准追踪，查看试剂空白和灵敏度变化。
6. 室内质控
室内质控是用来控制室内精密度，定标结果好与坏用室内质控去判断并不合适。但是如果室内质控很稳定，可作为定标结果的一个参考。有条件的话可参加卫生部或者所在省份内室间质评，以确认测量系统的准确性。
4、影响因素
重复性不好
校准品没有混匀或者试剂稳定性较差，可通过精密度实验排查原因。
校准类型
根据校准品浓度和吸光度之间呈现的关系，选择合适的校准类型。如果校准品浓度和吸光度呈线性关系，则不建议使用样条函数拟合；Logit双对数函数3P、4P、5P，虽然都是“收敛型”函数，但是收敛程度不一样，根据收敛程度确定合适的双对数函数校准类型。
校准品浓度
校准品浓度如果设置不合理，有可能拟合结果较差，导致点不在校准曲线上，定标回测较差。
（责任编辑：zqg）
