一、 导向知识：生化分析仪的基本原理是分光光度计，或者俗称比色计。分光光度计的依据是“朗伯—比尔定律”。
朗伯—比尔定律阐述了液体吸光度与液体浓度的关系，并且引申出相应的公式及推导公式。
在相同波长下，吸光度越高，溶液的色度也就越深，反之越浅。
一般来说，生化反应把吸光度增加的叫做正反应，或者叫做上升反应，色度越来越深；吸光度下降的反应叫做负反应或者下降反应，色度越来越浅。
二、 生化的测试方法：从分光光度计的方法来说，有透射和散射两种方法，生化仪只用到透射法，因为它只有一套光路。生化的测试方法只有两种，那就是终点法和速率法，其余方法都是衍生法。
1. 终点法顾名思义，在反应终点进行吸光度测定的方法，其衍生方法有一点终点法，对应单试剂；两点终点法对应双试剂。还有一些相关的概念：试剂空白、血清空白。
2 一点终点法：也就是单试剂采用的方法。
这是奥林巴斯的曲线示意图，它是R1+S方式，所有生化仪都是以样本S的加入为正式读点的开始，之前加入的试剂读点都为0或负数。所有试剂和样本加入后，都进行搅拌
上图中R1加入搅拌后进行第一个读点吸光度测试，读点编号为0，然后加入样本再次搅拌开始正式读点1-27。而测试读点是27，也就是反应终点。当然，不一定非要到最后一个读点，很多蛋白反应速度很快，几分钟就到达终点，所以根据情况设置。
而东芝的机器代表着另一类机型，那就是S+R方式，但S和R在同一圈内加入，所以读点从1开始，没有0也没有负数。
从上图可以看出，第一点已经开始反应了，没有奥林巴斯机型那样有个平坦的水平线。这个图例反应时间比较长，直到30以后才趋于平稳反应终结，所以读点算在了32-33点。也就是最后两点。
3 两点终点法，也就是双试剂常用的终点法。
在奥林巴斯机型中，双试剂会出现两个或三个平坦的区域，R1加入之后，和S加入之后，如果是终点法，会在反应终点还会出现一个。
那么两点终点法除了在27点读一个之外，还要在10点读一个点，也就是在R2加入之前读一个点。这样反应吸光度值就等于终点吸光度值减去试剂样本空白，注意是试剂样本空白，不是试剂空白，所以这个点只能在S之后，R2之前。惯例一般在R2之前的一个点，而不是R2之前S之后的任意点。
下面是东芝的图例：
由于是S+R1，所以曲线开始就进行反应，除去杂质消除干扰，直到R2加入前趋于稳定。16点之后加入R2，正式反应启动，直到27点趋于稳定，所以终点读点选在32-33上。而试剂样本空白选择在14-16上。
总结：一点终点法适用于单试剂，两点终点法适用于双试剂，但第一点要在R2之前的一点。
4 速率法：使用最小平方法计算两点间的吸光度变化，确定每分钟吸光度的变化率，也就是ΔOD/min。
常规的速率法是在R2加入之后，给出两个读点，系统根据两点间的时间，自动计算每分钟的吸光度变化。
可以看出上图读点范围是21-27点。
采用常规速率法有个前提，那就是R1加入之后前期反应趋于稳定，比较平坦，加入R2之后迅速启动反应，形成斜线，读点范围取在斜线上。
如果R1加入之后也是斜线，那就要使用双速率法，也就是在试剂样本空白的斜线上取一段进行空白速率计算。
双速率法很少使用，与常规速率法的结果比较差别也不是很大。
在日立、迪瑞等机型中，常规速率法叫速率A法。
图例中的速率法每点线性都很好，但遇到每点线性不好的，就会报错，结果被拒绝、屏蔽。线性不好一方面是试剂质量问题，另一方面是反应特征，无法保持线性。那么这种问题各个厂家也都有对应，日立叫做两点速率法，奥林巴斯叫做固定点法。
5 两点速率（固定点）法：确定特定两点间的吸光度差值，无线性甄别。
还有引申出来的双固定点法，对应双速率法：
面两图都是奥林巴斯的，下面是日立的两点速率法。
6 速率法的底物耗尽问题。所谓底物耗尽，就是样本浓度太高，试剂提供的反应物质迅速反应完，而样本中的检测物质还有很多没有参与反应。通俗的话讲，就是在速率法的反应中看到了终点法的曲线。
图例中看到的是典型的日立速率A法，见到这样的图，结果肯定偏低甚至为0或者负值。这样的图首先应该想到方法是不是错误，如果速率法没错，那就只有一个可能，底物耗尽。遇到这种情况，一般都采取自动或人工稀释重测的方法解决。而东芝及其OEM机型雅培的生化仪，还有日电及拜耳的机型，可以自动进行判别，并将读点前移。东芝叫做弹性速率法，日电叫做读点前移。概念是这样的：
以上右图为例，速率法选择的主读点区为22-28，并加以吸光度判别和线性判别，当出现底物耗尽时，这个主读点区的线性几乎停滞，吸光度变化降低到几乎为0，这种情况下启动弹性速率读点区，一般设置在R2加入后10点以内，比如选择在17-21这个区间里。在弹性速率区间里进行速率法计算，从而得出一个较高的浓度值，因为这一区间反应速度很快。
这种方法以前有很多医院的老师作过实验并发表过论文，针对进口仪器与手工稀释的结果比对，符合率高达96%。这样一来，省工省力，节省了医院最为看重的成本。
（责任编辑：lgh）
