碱性磷酸酶染色
成熟中性粒细胞中含有较多碱性磷酸酶。在碱性条件下，碱性磷酸酶经镁离子激活后能将磷酸酯水解为磷酸钠和甘油，磷酸钠再与氯化钙、硝酸钴、硫化铵发生一系列化学反应，生成棕色的硫化钴定位于胞质内。
试剂
（1）孵育液：30g/Lβ-甘油磷酸磷酸磷酸钠5ml，20g/L巴比妥钠5ml，20g/LCaCl210ml，其pH以9.2～9.5为宜。
（2）20g/L硝酸钴。
（3）20g/L硫化铵（新鲜配制），或10ml蒸馏水加硫化铵4滴混合。
（4）10g/L伊红。
操作方法
（1）将标本用95%乙醇固定10min，晾干。
（2）置标本于37℃的孵育液中，保温6～8小时。
（3）加20g/L硝酸钴5min。
（4）流水冲洗，滴加20g/L硫化铵5min。
（5）流水冲洗，加10g/L伊红复染5min。
正常值 成熟中性粒细胞呈阳性，其他细胞均呈阴性。
阳性积分正常参考值：80分以下（以计算100个中性杆状核和分叶核粒细胞为准）。
化验结果临床意义
积分降低：见于病毒感染，恶性组织细胞增生症，阵发性睡眠性血红蛋白尿症，急、慢性粒细胞性自血病，红、白血病，骨髓增生异常综合征，继发性红细胞增多症，急性单核细胞性白血病，慢性淋巴细胞白血病。当病情缓解时，积分又可上升到正常。
积分升高：见于化脓性细菌感染、急性大出血、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血、红血病、骨髓增生性疾病、急性淋巴细胞白血病、类白血病反应、恶性淋巴瘤、恶性肿瘤、激素治疗等。再生障碍性贫血治疗好转时，积分可降低。
附注
(1)阳性积分计算方法：阳性反应主要见于粒细胞系成熟阶段的分叶核和杆状核细胞的胞质中出现灰色或棕黑色颗粒，其阳性程度分级及积分计算如下。
“-”即阴性反应：0分。
“+”即胞质1/2以下区域出现阳性颗粒：1分。
“++”即胞质l/2～2/3区域出现阳性颗粒：2分。
“+++”即胞质全部出现阳性颗粒，呈片状分布，密度较低：3分。
“++++”即胞质全部都被块状沉淀所充满，密度高：4分。
（2）由于各实验室的实验条件不同，正常参考值也有差异。应建立本实验室的正常值。
（3）碱性磷酸酶活性有生理性变化。新生儿碱性磷酸酶活性升高，以后逐渐下降。成人较儿童活性低，老年期更低。在应激状态下，如紧张、恐惧、剧烈运动时活性可升高。月经前期，活性也可升高。
（4）碱性磷酸酶阳性积分，在妊娠2～3个月时可轻度升高，以后逐月升高，分娩时达高峰，产后恢复正常。
相关疾病
阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合征、继发性红细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血、急性淋巴细胞白血病、类白血病反应、恶性淋巴瘤
非特异性酯酶染色
用于急性单核细胞白血病与其他类型白血病的鉴别诊断。在急性单核细胞白细胞病时，NSE为强阳性反应；而粒细胞和淋巴细胞为阴性反应。
血细胞中所含酯酶各不一致，但皆系作用于短链脂肪酸的酯酶，统称非特异性酯酶。其显示方法是采用偶氮偶联法。由于提供水解的基质不同，血细胞中常见酯酶有以下几种：
α-乙酸萘酚酯酶（α-naphthol acetate esterace,α-NAE)
乙酸AS-D萘酚酯酶（naphthol-AS-D-acetate esterase,AS-D-AE）
醋酸AS萘酚酯酶（naphthol-AS-acetate esterase,AS-AE）
氯化醋酸AS-D萘苯分醋酶（naphthol-AS-D-Chloroacetate esterase,AS-D-CE）
非特异性酶在白细胞中的分布及应用：
α-NAE：急性单核细胞白血病，急性粒—单核细胞白血病的幼稚细胞呈强阳性反应。急性粒细胞性白血病的幼稚细胞为弱阳性反应。早幼粒细胞白血病阳性强度可比急性单核细胞白血病，急性粒—单核细胞白血病更高。急性淋巴细胞白血病则为阴性，偶见局灶性分布的颗粒状阳性，巨核细胞血小板呈强阳性。
α-NAE有助于急性单核细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性粒—单核细胞白血病与急性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病的鉴别。
AS-D-AE：急性单核细胞白血病呈阳性反应，急性粒细胞白血病呈现弱阳性，急性粒—单核细胞白血病阳性程度介于急性粒细胞与急性单核细胞白血病之间，急早幼粒细胞白血病呈现阳性，急性淋巴细胞白血病含量较少，呈阴性或微弱阳性反应。
AS-D-AE有助于急性单核细胞白血病，急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病及淋巴细胞白血病的鉴别诊断。
AS-AE：与AS-D-AE结果相同，敏感度不如AS-D-AE。 AS-D-CE：主要存在在于粒细胞内，实为粒细胞系统的特异性酯酶（亦称SPE）。
急性粒细胞白血病（M1）、急性粒细胞白血病（M2）、早幼粒细胞白血病（M3）均呈阳性反应，但其阳性程度不一，其中M1阳性较弱，M2较强，M3最强（阳性细胞可达99%），据报导AS-D-CE持续呈阳性反应者，提示急性粒细胞白血病病性恶化。
慢性粒细胞性白血病，粒细胞系统皆为阳性反应。急性单核细胞白血病绝大多数幼稚细胞呈阴性，少数细胞可呈微弱阳性。急性粒—单核细胞白血病，分化程度较好的原始粒细胞，及其以下阶段的粒细胞皆为阳性反应，但原始及幼稚单核细胞绝大多数呈阴性反应。
红白血病原始及幼稚粒细胞呈阳性反应。原始及幼稚红细胞全部为阴性，急性淋巴细胞白血病均为阴性反应，AS-D-CE对鉴别急性粒细胞白血病与急性单核细胞白血病具有重要诊断价值。
非特异性酯酶染色检查nonspecificesterase，NSEα-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)染色检查、单核细胞型酯酶染色检查能将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，再与重氮染料偶联，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞质内。
胞质中出现有色沉淀者为阳性反应。因所用的重氮盐不同，阳性反应的沉淀可分灰黑色或棕黑色。此酶主要存在于单核系细胞中，故有人称之为单核细胞型酯酶。原单核细胞为阴性反应或弱阳性反应，幼单核细胞和单核细胞呈阳性反应。
粒系细胞一般为阴性或弱阳性反应。淋巴细胞一般为阴性反应。对鉴别单核细胞白血病有重要意义。正常单核细胞和原始单及幼稚单核细胞均呈阳性反应，其他血细胞呈阴性或弱阳性反应。急性单核细胞白血病细胞呈强阳性反应，但单核细胞中的酶活性可被氟化钠抑制，故在进行染色时，常同时做氟化钠抑制试验。
急性粒细胞白血病时，呈阴性反应或弱阳性反应，但阳性反应不被氟化钠抑制。因此，本染色法主要用于急性单核细胞白血病与急性粒细胞白血病的鉴别。
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