1. L-A1c对GHb检测的影响
L-A1c为GHb的初期反应产物, 结构不稳定, 随血糖浓度而变化, 既可水解成为葡萄糖和Hb, 也可以继续反应生成更为稳定的醛胺。L-A1c不能反映平均血糖浓度, 但可影响GHb的测定结果。硼酸盐亲和色谱法和免疫法不检测L-A1c, 故不受其影响。离子交换色谱法和电泳法则受L-A1c影响较大, Camargo 等研究发现L-A1c可使离子交换色谱法测定的GH b值比实际值高1. 64% 。最简单也是最耗时的去除L-A1c的方法是将全血样本用溶血剂处理, 将溶血产物置于37 的等渗液中孵育6个小时。
2. Hb变异体对GHb检测的影响
据报道Hb有700余种变异体, 大多数起源于Hb 的α、β、γ、或δ链的点突变。许多新的Hb变异体并无表型异常。临床中最常见的Hb变异体是HbF、HbS 和H bC。
（1）HbF
HbF是胚胎时期的Hb由2条α 链和2条γ 链组成。出生时, 70% 的Hb 是HbF, 6个月后降到5%以下。遗传性H bF持续存在的个体体内其浓度可达到总Hb的30% , 而β-地中海贫血和镰状细胞病患者体内HbF 的浓度占总Hb 的2% 到20% 变化不等。
离子交换色谱法和亲和色谱法的检测结果不易受H bF 影响, 而免疫法受到HbF 的干扰较大。Roh lf ing 等 发现即使HbF浓度> 15%, B io-RadVariant 和Tosoh G7两种离子交换层析柱也不会受到影响。但CLC330 /385 亲和层析柱、DCA-2000免疫法、Tosoh2. 2+ 离子交换色谱法的测定结果偏低, 尤其当HbF> 20%时, 测得的GHb值可下降1%甚至更多。CLC330 /385亲和色谱法会受到H bF的干扰, 可能因为与HbA 相比, HbF的糖化速率较慢。HbF可使DCA-2000 免疫法的测定值偏低, 因为在HbF分子中HbA 的??链被!链取代, 而!链氨基端起始的几个氨基酸与??链不同, GHb抗体不能与H bF 的糖化位点相结合, 但总Hb 却包括了HbF。从Tosoh 2. 2 + 离子交换的色谱图可以看到HbF的峰未能从总峰的面积中分离, 导致测定值偏低。
（2）HbS
Hb变异体有明显的地区、种族差异。在美国HbS是最常见的Hb 变异体,7. 8% 的非洲裔美国人患有此种镰状细胞病, 纯合子镰状细胞病患者约有50 000 人。在非洲的撒哈拉地区, 在检测GHb 的患者中约有三分之一可检出HbS 。
亲和色谱法在含有HbS 的血样中也可准确检出HbA1c。HbS对离子交换色谱法的检测结果有不同的影响取决于所使用的方法和平台。Tosoh2. 2+ 、Tosoh G7和HA8160 方法的测定结果不受HbS影响。HbS对B io??Rad Variant高压液相系统的影响不确定, 有时GHb的值会偏高, 尤其在HbA1c范围较低时。也有时HbA1c的值不受影响, 可能与层析柱及试剂的批次不同有关。应用DCA-2000和T inaQuant进行检测时, 抗体对抗原决定簇的识别能力会下降, 与前4~ 6个氨基酸有关, 不受HbS 的影响。用RocheUn imate进行免疫法测定时, 所用的抗体与DCA-2000 相同, 但测定的结果却明显偏高。Un imate法与DCA-2000不同, 是用胃蛋白酶裂解氨基末端的??链, 然后测定肽片段的糖化 。推测可能抗体与HbS1c和HbC1c 肽片段结合的亲和力更高, 导致GHb值的假性偏高 。
（3）HbC
HbC在非洲裔美国人中检出率为2. 3%, 而在非洲的撒哈拉地区人群中的分布频率高达30% 。Lee 等用硼酸盐亲和色谱法计算糖化Hb占总Hb的百分比, 认为HbS不会对该法形成干扰。在离子交换色谱法中, 只有B ioRad Variant 不会受到HbS的影响, Tosoh G7和HA8160的测定值均偏低, 这与以前的报道相同。日本的报道也显示, 用离子交换色谱法检测含有HbS的样本时测定值低于硼酸盐亲和色谱法和免疫法。推测用离子交换色谱法检测时, 糖化HbC 可从A1c峰中分离出来, 但是非糖化的H bC 却不能从A0峰中分离, 导致HbA1c的测定值偏低。Lee等 还发现, HbC 的存在对新的酶法Norudia 和4种免法( DCA-2000、Unimate、T inaQuant !、AU640)的测定值均无影响。
3. 常见的化学衍生物对GHb检测结果的影响
氨基甲酰Hb在尿毒症患者血中浓度升高, 是最常见的干扰GHb检测的化学衍生物。尿素在体内可自发地分离形成氨和氰酸盐, 氰酸盐经质子化作用后形成异氰酸, 异氰酸与蛋白质的α 和ε 氨基基团反应即形成氨基甲酰。Hbβ 链N 端的缬氨酸可与异氰酸发生特异性的结合反应, 形成稳定的氨基甲酰Hb。氨基甲酰Hb与HbA1c的等电点相似, 故可对依据电荷原理检测GHb的方法形成干扰。电泳法对氨基甲酰H b非常敏感。在体内, 氨基甲酰化的Hb浓度超过5. 4% 时就会使离子交换法测定的GHb值发生极大的假性偏高。以离子交换色谱法检测GHb 的仪器有B io-Rad Variant、D iamat、Tosoh A1c2. 2+ 等。Lee 等发现, 用离子交换色谱法测定GHb 时, 如尿素浓度超过17mmo l/L, 每升高1mmo l/L会使HbA1c值升高0. 04%。免疫法和亲和色谱法的仪器包括T inaQuant ! ( Roche)、DCA-2000( Bayer)、CLC 385( Primus)等, 不受尿毒症患者血中氨基甲酰Hb的影响。此外进行透析的尿毒症患者红细胞寿命会缩短, 也可影响GHb检测结果的准确性。
4. 影响红细胞生存时间的因素对GHb检测结果的影响
GHb在红细胞内的合成进程是缓慢连续进行的, 任何使红细胞寿命缩短的疾病都会导致GHb形成的时间也相应缩短, 致使检测结果也受到影响。某些基础疾病引起的继发性溶血往往使检测值偏低, 如肝硬化、脾肿大、糖尿病等。EPO 治疗及极度贫血患者的输血治疗也会影响GH b检测结果。不同的测定方法所形成的干扰各不相同。维生素C和维生素E 可抑制H b糖基化, 使测定结果假性降低。Coban等 发现缺铁性贫血患者血糖浓度恒定、红细胞减少时, GHb 测定值升高, 用铁剂( 100mg /d)治疗3个月后, 由于幼红细胞的出现稀释了Hb浓度, 使GHb平均值由7. 4%降到6. 2% 。
5. 贮存温度对GHb检测结果影响
样本贮存时间、温度及GHb测定方法都与GHb检测结果有关。随着样本贮存时间延长, 测定结果会逐渐升高。与其他方法相比, 离子交换色谱法和硼酸盐亲和色谱法在任何温度下稳定性都较好。大多数检测方法的样本都可在- 70℃ 低温冻干条件下保存1年, 检测结果不受影响 。在4℃ 时, 全血样本可保存1周,在室温条件下, 全血样本稳定性较差, 只能保存数天。在37℃ 条件下, 未经任何处理的全血样本稳定性最差, 无论何种检测方法的样本有效保存时间均小于1 d。
6. 其他影响因素
年龄、种族、性别、空腹血糖、餐后两小时血糖等均是GHb测定准确性的独立影响因素。一般认为年龄与GH b 值无关, 但Pani 等对2473名正常人和3270 名血糖调节受损者进行GHb测定, 在调查性别、体重指数、空腹血糖、餐后2 h血糖等因素后, 认为年龄每增加1 岁, GHb测定值升高0. 03%。不同种族的糖化血红蛋白值不同, Herman等对3819名血糖调节受损者测定GHb, 在调整年龄、性别、教育、婚姻、血压等多项影响因素后, 美国白种人、西班牙裔人、亚洲裔人、印第安人的GHb 平均值分别为5. 78% 、5. 93% 、6. 00%、6. 18% , 差异具有统计学意义。
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