1、NGSP标准化出现了问题
糖化血红蛋白(GHb≠真正HbA1c)被美国DCCT研究与在NGSP计划中指定作为比较方法的Bio-Rad 70 HPLC方法,与瑞典推荐Mono S HPLC方法为标准化方法之间,在判断限水平处的差异达20%。日本发表的临床试验也说明,尽管也采用了HPLC技术检测HbA1c,但是HbA1c的值低于美国NGSP的值。DCCT的参考方法检测的值,并不是真正的唯一HbA1c值。DCCT/NGSP的标准化只能依据密苏里大学实验室的HPLC仪器分离结果为唯一标准化的依据。即没有任何HbA1c参考物质或确认该物质的参考方法。
2、IFCC的糖化血红蛋白标准化
1995年IFCC组成了HbA1c标准化工作组(IFCC-WG)以实现检测的统一国际标准,发展和确认了2个侯选参考方法和HbA1c、HbAo(非糖化血红蛋白)参考物,作为全球可比性分析准确度的基础。
(1)首先IFCC确定了HbA1c被测量。IFCC命名、属性和单位委员会(C-NPU)批准了以往被称为‘HbA1c’的参考检测程序(方法)。该程序测量的是单一分子属性;允许计算检测结果为“物质组分的量(mol)”;而不是质量(重量)组分(kg)。在计量上可溯源至国际单位制(SI)。该委员会认识到:在所有β-链的血红蛋白的中,β-链N-纈氨酰-1-果糖基血红蛋白 (valyl-1-fructosylated haemoglobin β-chains),可被IFCC参考测量程序特异地测量,所以在计量上可溯源至具有“毫摩尔每摩尔(mmol/mol)”计量单位某物质组分。因此,现在IFCC标准化检测被测量非常明确。检测的非糖化血红蛋白为β-链的血红蛋白(HbA0);检测的糖化部分为β-链N-纈氨酰-1-果糖基血红蛋白(HbA1c),即[β-(N-脱氧果糖基) 血红蛋白]。
以往(即不规范)的用语和测量(检测)单位:原IFCC-IUPAC的NPU数据库有‘HbA1c’的专用的属性类的词语,该被测量的代码为NPU03835:命名的是血红蛋白(Fe;全血)和血红蛋白A1c(Fe);为物质的组分;其计量单位被假设为“1”。
(2)IFCC的HbA1c参考测量系统
a)2007年欧洲参考物质和参考测量研究院(IRMM),发布了IRMM/IFCC-466号批准的参考物质,是人全血分离的血红蛋白,内含非糖化的HbA0和糖化的HbA1c。该物质给出了HbA1c/(HbA0+HbA1c)值(mmol/mol)。
b)2002年发表了批准的检测人全血中HbA1c的IFCC参考方法。有两个参考方法:HPLC/电雾离子化质谱方法(HPLC-ESI/MS)与HPLC/毛细管等电聚焦电泳方法(HPLC-CE)。二者原理与工作均很好,并得到一样的结果。这两个方法依据对血红蛋白β链的N-端的特定检测。以胞内蛋白酶Glu-C水解完整的血红蛋白分子,得到HbA1C和HbA0的β-N-端的六肽多肽。这些多肽以反相HPLC分离,并由电喷射离子化-质谱(方法A)或由毛细管电泳(方法B)进行定量。以这些多肽和联用分离技术,有可能克服以往使用的HbA1C蛋白分离系统的不足分辨率。
c)已经实施了参考检测实验室的网络。每年进行两个实验,对分发的物质进行检测比较,也为候选的校准品和控制品定值。自1999年起实施了这些研究,在新技术的信息可用下,定期更新重新确定参考检测程序非常重要。
d)在IFCC参考检测实验室和DCM(现有的指定比较方法,如美国的NGSP)间实施了多次比较研究。这些研究发现,IFCC和不同的DCM系统间和发表的相应回归等式(“一级等式”)的关系是稳定的。
e)以新鲜和冰冻全血组形式已经产生了二级参考物质。这些物质分发给厂商和实施DCM的实验室,使它们的方法校正至IFCC参考系统。
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