近日，国际杂志 《Journal of Clinical Laboratory Analysis》上在线发表一项关于开发和评估用于检测威尔逊氏病中ATP7B突变的非标记高分辨率探针的研究。
威尔逊病（WD）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，其特征主要表现为肝脏或神经系统中铜的沉积，导致相关的功能障碍。编码ATPase，Cu +转运，β多肽（ATP7B）的基因突变是WD的致病因素。这项研究的目的是开发一种快速方便的检测三种最常见的致病性ATP7B突变p.R778L，p.P992L和p.V1106I的检测方法。
研究人员构建了分别含有三个ATP7B突变中的DNA片段的质粒。通过使用配对引物和非标记探针的不对称聚合酶链反应（PCR）扩增进行高分辨率融合（HRM）分析，在96孔板LightCycler 480实时PCR系统中进行。通过对41例WD病例进行基因分型评估该方法的准确性和可重复性。
研究发现，在ATP7B基因中具有p.R778L，p.P992L和p.V1106I突变的构建体上进行的未标记的探针HRM测定出现了额外的熔解峰值。根据未标记的HRM分子标记，可以将纯合突变与野生型进行区分，其中ΔTm（熔解温度之差）> 4°C，重复性试验的变异系数<5％。在使用此方法检查临床样品的验证测定中，可以达到100％的准确率。 新开发的快速基因型ATP7B突变的测定方法具有准确和可重复的优点，并且显示了Sanger测序在鉴定特异性ATP7B突变中的优势。 原始出处： Anjian Xu, Tingxia Lv, Bei Zhang, et.al. Development and evaluation of an unlabeled probe high-resolution melting assay for detection of ATP7B mutations in Wilson's disease. （责任编辑：sgx）
