目的 分析佛山地区新生儿血红蛋白E合并地中海贫血基因型和血液学表型的关系。结论 佛山地区新生儿人群异常Hb E病检出率为0.16%，杂合子均出现中度贫血，合并αF和β地中海贫血者贫血加重。血红蛋白E（hemoglobin E，Hb E）是世界上常见的三大异常血红蛋白之一，多见于东南亚地区国家，在我国以广东、广西多见[1]。通过对佛山地区126,939例新生儿血斑卡样本检出55例Hb E病患者进行基因型和表型进行分析，进一步为新生儿筛查和临床诊治提供参考。资料与方法 1.1 研究对象选取佛山2019年1月~2020年12月的新生儿，进行地中海贫血血红蛋白电泳初筛共126,939名。1.2 标本采集新生儿出生后48~72小时采血，采集足底血，毛细管电泳初筛阳性者，召回中心重新采血做基因检测。1.3. 方法1.3.1 血细胞分析用Sysmex XT-2000i全自动血细胞分析仪进行测定，将红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均红细胞含量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）作为主要观察指标。 1.3.2 全自动毛细管电泳检测采集的血片经打孔制成试验用直径3.2mm的血斑，每孔加入蒸馏水浸泡血斑，须于2~72小时内用全自动毛细管电泳仪上机检测。经稳定恒压下电泳， 415nm波长检测血红蛋白（Hb）各组分百分比。HbA2带和Hb E条带自动区分识别 。 1.3.3 地中海贫血基因分析采用DNA快速提取试剂盒提取全血DNA，进行聚合酶链式反应（PCR），将PCR扩增产物与标记不同缺失或突变类型地中海贫血探针的尼龙膜在导流杂交仪上进行导流杂交，然后通过化学显色对结果进行判读。用α地中海贫血检测试剂检测中国人常见的3种非缺失（αCSα/αα、αWSα/αα、αQSα/αα）和3种缺失型（-α3.7/αα 、-α4.2/αα 及–SEA/αα）。β地中海贫血检测试剂检测常见17个位点突变（CD41 -42、CD71-72、CD14 -15、CD27/28、CD17、 CD31、CD43、IVS -II -654、IVS-I-1、IVS-I-5、 -28、-29、-30、-32、βE、Cap、Int）。 1.3.4 统计学处理使用EXCEL软件记录采集数据，采用SPSS 21进行统计学分析。以P＜0.05表示差异有统计学意义。 结果 2.1总体情况2019~2020年本中心共126,939名新生儿进行血红蛋白毛细管电泳初筛检测，其中检出Hb E条带样本208例，经中心召回55名进行了基因检测，召回率为26.44%，该55例经基因检测均确诊为异常Hb E病。按比例佛山地区新生儿人群异常Hb E病检出率为0.16%。55例异常 Hb E病患者的基因型分布情况：Hb E杂合子44例，Hb E合并 –SEA/αα 3例，Hb E合并-α3.7/αα 3例，Hb E合并αCSα/αα 2例，Hb E合并α4.2α/αα 1例， –SEA/αα复合β654／βE 1例，–SEA/-α3.7复合βN／βE 1例。2.2血液学特征根据国家卫生行业标准，55例新生儿异常Hb E病均呈小细胞低色素性贫血。55例异常Hb E基因型分布为Hb E杂合子44例和Hb E复合α、β地中海贫血11例。44例Hb E杂合子为中度贫血。其中，Hb E复合α、β地中海贫血组的血常规指标HGB、MCV、MCH均低于Hb E杂合子组。两组MCV、MCH差异无统计学意义（P>0.05），但两组HGB均值的差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。表1 44例新生儿 Hb E杂合子与11例Hb E合并α、β地中海贫血的血液学特征 11例Hb E复合α、β地中海贫血中，10例Hb E复合α地中海贫血，贫血程度加重，红细胞数逐渐降低，尤其Hb E复合–SEA/-α3.7时，HGB 99 g/L ，MCV62.5fl，小细胞低色素更加明显，贫血象加重。1例Hb E同时复合α-、β-地贫（–SEA/αα β654/βE），RBC为3.9 1012/L，HGB为89 g/L，MCV为72.8 fL。Hb E复合不同类型的地中海贫血时，血液学指标RBC、HGB、MCV、MCH 等参数均有不同的变化，见表2。表2 55例新生儿 Hb E合并α、β地贫的血液学指标分析及基因型分布比较（±ｓ） 毛细管电泳检测可见Hb E条带。本研究中44例单纯Hb E杂合子样本，毛细管电泳均未出现Hb Bart’s条带；而11例Hb E复合轻型地中海贫血（-α3.7/αα、-α4.2/αα、-αCS/αα）或中间型α地中海贫血（–SEA/αα），毛细管电泳均出现Hb Bart’s条带。因此，当电泳出现同时出现Hb Bart’s条带时，应考虑Hb E复合轻型地中海贫血（-α3.7/αα、-α4.2/αα、-αWS/αα、-αCS/αα、-αQS/αα）或中间型α地中海贫血（–SEA/αα）。见表3和图1。表3 55例新生儿Hb E合并α、β地中海贫血的各组分血红蛋白的情况（±ｓ） 图1 单纯Hb E（a）与Hb E合并α地中海贫血（b）的毛细管电泳图 讨论 本研究调查了佛山地区新生儿人群异常Hb E病检出率为0.16%。低于广西和广东信宜地区成人异常血红蛋白E的检出率，可能原因在于召回率不够高，召回率为26. 44%，若有更多毛细管电泳检测出Hb E条带的新生儿能做地中海贫血基因检测，那确诊Hb E病检出率会更高。 通过研究，两组HGB均值差异有统计学意义（P＜0.05），符合杜丽等人研究[13]我国大多数异常血红蛋白没有明显的表型，少数异常血红蛋白合并地中海贫血之后会出现加重贫血象的表现，出现中度或重度的贫血，当出现Hb E复合α地中海贫血和β地中海贫血基因型时，形成α链和β链之间的互相影响，表现不同程度的贫血程度。本研究采用全自动毛细管电泳法，相比于琼脂凝胶电泳仪和高效液相色谱分析仪（HPLC），能更好的区分Hb E和Hb A2[3]。通过55例新生儿Hb E病研究，单纯Hb E杂合子（αα/αα βＮ/βE）时，均未出现Hb Bart’s，当电泳出现Hb Bart’s时，应考虑Hb E复合轻型地中海贫血（-α3.7/αα、-α4.2/αα、-αWS/αα、-αCS/αα、-αQS/αα）或中间型α地中海贫血（–SEA/αα）。新生儿Hb E在合并不同地贫基因型中，Hb E含量均有不同的变化。因此，通过研究，能进一步深入对新生儿血红蛋白E合并α-、β-地中海贫血的基因型和表型分析。 佛山地区Hb E异常血红蛋白病高发地区，提高初筛电泳召回，尽早的筛查出Hb E异常血红蛋白病患儿，也能够尽早提供遗传咨询及临床治疗，对该疾病的患儿的生长发育能进一步进行干预治疗。 参考文献[1] 杨继青,王华伟,张尊月,钱源,张兰,鲁玲,王昆华. 云南省100例异常血红蛋白E患者的血液学和基因型分析[J]. 中华医学遗传学杂志,2020,01:33-34-35-36.[2] 王继成,郭浩,黄华洁,等.罕见异常血红蛋白的诊断和临床特征分析[J].中国实验血液学杂志,2020,28(6):2028-2032.[3] 秦立，阳文辉，苏航就.血红蛋白电泳在新生儿地中海贫血筛查中的应用[J].中国优生与遗传杂志,2020,04:493+508.[4] Behdani F ,Badiee Z ,Hebrani P , Et al. Psychological aspects in children and adolescents with major thalassemia: a case-control study[J].Iran J PEdiart,2015,25(3):E322.[5] Angastiniotis, Michael. Thalassemias: An Overview[J]. Int J Neonatal Screen, 2019, 5(1), 16.[6] Zhong YH, Ye LX, Cai XJ, Xie CL, Chen JG. Gene characteristics and changing trend of neonatal thalassemia in Dongguan, China[J]. Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2020-05-01;22(5):454-459.[7] 苏恒学,梁亮,李友琼,田矛,覃婷.血红蛋白E病中血红蛋白A2和血红蛋白F水平及其分布研究[J].中国临床新医学,2019,12(12):1300-1302.[8] 钟永红,张浔,江帆,钟延东,屈艳霞,唐盈,刘如芹,陈桂兰.粤北地区育龄期夫妇异常血红蛋白病和β地中海贫血的筛查情况[J]. 中国计划生育和妇产科,2020,10:64-66+71.[9] 温应方,林敏,刘桂荣,等.广东梅州地区的异常血红蛋白病的分子流行病学调查[J]重庆医科大学学报,2011,36(12):1496-1499.[10] 唐海深,欧锦留,熊怡,陆林苑,王德刚.广东中山地区211例异常血红蛋白病例分析[J].中国优生与遗传杂志,2019,06:664-667+770.[11] 任天凤,杨浩,刘小琳,李乔.信宜地区育龄人群异常血红蛋白E病基因型分布以及血液学参数分析[J].临床医学研究与实践,2021,13:33-35.[12] 李春莉,杨梅,李秋红.重庆地区34 800例育龄期夫妇异常血红蛋白病分析[J].中国实验血液学杂志,2020,04:1316-1320.[13] 杜丽,秦丹卿,王继成,卢建,张艳霞,姚翠泽,杜娜.异常血红蛋白合并地中海贫血的基因诊断及血液学指标分析[J].中国产前诊断杂志（电子版）,2019,11(1):34-37.DOI:10.13470/j.cnki.cjpd.2019.01.008.[14] 李贵芳,周曼,许吟,等.贵阳市532例新生儿脐血α－地中海贫血筛查[J].中国妇幼保健，2011，26（1）：40-41.[15] 万志丹,黄湘,吴学威,等.全自动毛细管电泳仪在新生儿α珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用[J]．国际检验医学杂志，2012，33（11）：1308-1309.
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佛山地区55例新生儿血红蛋白E合并地中海贫血病例的基因型和表型特征
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