围产期B族链球菌检测方法的研究进展

作者 :褚雨晴 林杨 单位: 吉林大学第二医院妇产科  130041 长春通讯作者:林杨摘要     B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)又称为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),是一种兼性厌氧的革兰氏阳性球菌,主要定植于人体的消化道及泌尿生殖道,是导致围产期母胎感染的主要条件致病菌之一。临床中应重视GBS的危害,选择适宜的检测方法,对围产期孕妇进行GBS感染的普遍性检测,对可能出现的母婴感染进行及时的预防性治疗,以降低围产期孕妇感染和不良妊娠结局的发生。围产期孕妇B族链球菌的检测意义GBS是导致围产期孕妇感染的主要条件致病菌之一,孕妇体内定植感染的GBS在一定条件下可转变为致病菌,导致孕产妇或新生儿患侵袭性GBS病。GBS可通过产道上行扩散感染至子宫和胎膜,可能导致孕妇发生晚期流产、早产、胎膜早破,也可能导致孕妇出现无症状细菌尿、膀胱炎、肾盂肾炎、菌血症、羊膜腔感染、产后子宫内膜炎及产后脓毒血症等情况,甚至出现胎死宫内[4]。在围产期和分娩期可将GBS感染新生儿,可能导致新生儿出现败血症和中枢神经系统感染,严重者可能出现死亡,而存活者可因炎症损伤导致神经系统后遗症。国内外GBS预防指南简介美国疾病预防控制中心分别于1996年、2002年和2010年发布并修订GBS防治指南,最新指南建议,对于所有妊娠35~37周的围产期孕妇分别采集阴道下1/3和直肠拭子进行细菌培养,培养结果为阳性的孕妇即存在GBS定植,应给予GBS预防性治疗(IAP)   [8]   。  中华医学妇产科学分会于2011年颁布的孕前和孕期保健指南将GBS列为妊娠33~36周产前检查备查项目[9]。2021年中华医学会围产医学分会及中华医学会妇产科分会产科学组共同制定的《预防围产期B族链球菌病的专家共识》中,推荐所有妊娠35~37周的围产期孕妇进行GBS筛查,孕期患GBS菌尿者或既往有新生儿GBS病史者可直接按GBS阳性处理。GBS筛查有效期为5周,若GBS阴性者超过5周未分娩,建议重复筛查[10]。GBS实验室检测方法1. 微生物学检测方法  微生物学检测方法主要包括普通培养法和显色培养法,是实验室检测GBS的经典常规方法。普通培养法是明确GBS感染的金标准,但其耗时较长、操作过程复杂,并且孕妇生殖道中存在多种细菌,会影响最终GBS检测结果的判断;也可将标本接种于添加不同抗生素的选择性增菌肉汤后进行分离鉴定[12],该种方法可有效抑制非目标菌生长,但增菌后培养明显增加了检测时间,并对培养基的要求较高,因此临床使用受到限制。显色培养法是指在普通培养基中添加不同色素及混合抗生素,使得GBS生长产生特异性特征。但有研究表明,该种方法的敏感度低于普通培养基,这可能与混合抗生素抑制杂菌的同时也抑制了GBS生长有关[13]。2. 免疫学检测方法免疫学检测方法是采用特异性抗体检测抗原,常用的检测GBS的免疫学方法包括乳胶凝集试验(LA)、协同凝集试验(COA)、对流免疫电泳试验(CIE)、酶联免疫试验(ELISA)等。该种方法快速、便捷,但对于GBS菌量要求较高,因此可与增菌肉汤联合使用[14]。但缺点在于免疫学检测方法假阳性、假阴性率较高。分子生物学检测方法分子生物学方法检测方法主要包括荧光原位杂交技术检测、实时荧光PCR技术、多重荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。具有快速、准确、敏感度高等特点,是目前已知检测方法中的最佳方法,但其不足之处在于对检测人员及设备的要求较高,费用相对昂贵,且无法获得药敏结果。  荧光原位杂交技术检测可快速检测孕产妇阴道分泌物中的GBS[15-16]。实时荧光PCR技术,是以GBS特异性蛋白C5a肽酶、CAMP因子、Sip表面免疫蛋白等基因为目标基因,使用荧光定量PCR技术扩增,用萤光的强度检测产物的数量,进而进行GBS检测[17-18]。多重荧光定量PCR技术,是通过以检测GBS的荚膜多糖CPS基因为靶基因而建立的检测方法,可检测已知的多种GBS荚膜多糖[19],因此该种方法在避免血清学检测中的交叉反应同时,还可鉴定GBS的血清型。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是根据B族链球菌scpA基因的6个特殊区域设计了4条特异性引物,利用具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行链置换扩增反应,从而使靶基因高效扩增[20]。该种技术具有高效且特异性高的特点。总结与展望国内GBS实验室检测方法尚不统一,热点已逐渐从传统的培养法向免疫学、分子生物学等快速检测的方法转移。分子生物学的检测方法灵敏性与特异性不断提高,但对于检测人员及设备的要求也随之增加,在临床上大规模推广使用具有一定难度。并且,临床中针对GBS检测阳性的围产期妇女抗生素的选择,仍依赖于使用传统的细菌培养方法进行药敏试验。在实际临床应用中,面对各种不同情况,我们可根据各种检测方法的不同特点,选择性使用不同的围产期GBS检测方法。例如,单独使用分子生物学扩增技术检测GBS耗时短,可用于未行GBS筛查的孕妇产程中的即时检测,为GBS感染诊断与后续治疗提供一定依据 [2] 。目前国内相关研究较为滞后。国内围产期GBS检测的实验室方法方法均有所不足,仍需要进一步研究快速、准确、敏感且适用于大规模筛查的GBS围产期检测方法,为国内围产期GBS筛查及防治策略的制定提供基础。  参考文献[2]  Prevention of Group B Streptococcal Early-Onset Disease in Newborns: ACOG Committee Opinion, Number 797 [J]. Obstet Gynecol. 2020 Feb;135(2):e51-e72.[3]  Russell NJ, Seale AC, O’Sullivan C, et al. Risk of Early-Onset Neonatal Group B Streptococcal Disease With Maternal Colonization Worldwide: Systematic Review and Meta-analyses [J]. Clin Infect Dis. 2017 Nov 6;65(suppl_2):S152-S159.[4]  Seale AC, Bianchi-Jassir F, Russell NJ, et al. Estimates of the Burden of Group B Streptococcal Disease Worldwide for Pregnant Women, Stillbirths, and Children [J]. Clin Infect Dis. 2017 Nov 6;65(suppl_2):S200-S219.[5]  Creti R, Imperi M, Berardi A, et al. Italian Neonatal GBS Infections Working Group. Neonatal Group B Streptococcus Infections: Prevention Strategies, Clinical and Microbiologic Characteristics in 7 Years of Surveillance [J]. Pediatr Infect Dis J. 2017 Mar;36(3):256-262.[6]  Berardi A, Trevisani V, Di Caprio A, et al. Understanding Factors in Group B Streptococcus Late-Onset Disease [J]. Infect Drug Resist. 2021 Aug 17;14:3207-3218. doi: 10.2147/IDR.S291511. PMID: 34429620; PMCID: PMC8380284.[7]  Schrag SJ, Zell ER, Lynfield R, et al. Active Bacterial Core Surveillance Team. A population-based comparison of strategies to prevent early-onset group B streptococcal disease in neonates [J]. N Engl J Med. 2002 Jul 25;347(4):233-9.[8]  Verani JR, McGee L, Schrag SJ. Division of Bacterial Diseases, National Center for Immunization and Respiratory Diseases, Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Prevention of perinatal group B streptococcal disease–revised guidelines from CDC, 2010 [J]. MMWR Recomm Rep. 2010 Nov 19;59(RR-10):1-36. PMID: 21088663.[9]  漆洪波,常青,李力.孕前和孕期保健指南(第1版)[J].中华妇产科杂志,2011(02):150-153.[10] 中华医学会围产医学分会.中华医学会妇产科学分会产科学组.预防围产期B族链球菌病(中国)专家共识[J].中华围产医学杂志,2021,24(08):561-566.[11] Larsen JW, Sever JL. Group B Streptococcus and pregnancy: a review [J]. Am J Obstet Gynecol. 2008 Apr;198(4):440-8; discussion 448-50.[12] Heelan JS, Struminsky J, Lauro P, et al. Evaluation of a new selective enrichment broth for detection of group B streptococci in pregnant women [J]. J Clin Microbiol. 2005 Feb;43(2):896-7.[13] Rosa-Fraile M, Rodríguez-Granger J, Camacho-Muñoz E, et al. Use of unmodified starches and partial removal of serum to improve Granada medium stability [J]. J Clin Microbiol. 2005 Apr;43(4):1989-91.[14] Pincus SH, Moran E, Maresh G, et al. Fine specificity and cross-reactions of monoclonal antibodies to group B streptococcal capsular polysaccharide type III [J]. Vaccine. 2012 Jul 6;30(32):4849-58.[15] Tajbakhsh S, Norouzi Esfahani M, Emaneini M, et al. Identification of Streptococcus agalactiae by fluorescent in situ hybridization compared to culturing and the determination of prevalence of Streptococcus agalactiae colonization among pregnant women in Bushehr, Iran [J]. BMC Infect Dis. 2013 Sep 8;13:420.[16] 姚明媚,李艳,李从荣.两种快速鉴定B组链球菌方法的建立及评估[J].中华检验医学杂志,2006(09):847.[17] de Tejada BM, Pfister RE, Renzi G, et al. Intrapartum Group B streptococcus detection by rapid polymerase chain reaction assay for the prevention of neonatal sepsis [J]. Clin Microbiol Infect. 2011 Dec;17(12):1786-91.[18] Berg BR, Houseman JL, Garrasi MA, et al. Culture-based method with performance comparable to that of PCR-based methods for detection of group B Streptococcus in screening samples from pregnant women [J]. J Clin Microbiol. 2013 Apr;51(4):1253-5.[19] Zeng X, Kong F, Morgan J, et al. Evaluation of a multiplex PCR-based reverse line blot-hybridization assay for identification of serotype and surface protein antigens of Streptococcus agalactiae [J]. J Clin Microbiol. 2006 Oct;44(10):3822-5.[20] Wang D, Liu Y. Development of Primer Sets for Loop-Mediated Isothermal Amplification that Enables Rapid and Specific Detection of Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis and Streptococcus agalactiae [J]. Int J Environ Res Public Health. 2015 May 26;12(6):5735-42.-End-题图 | veer.com
(责任编辑:dawenwu)

常见问题
  • 如何在体龙基因完成所需的检测项目 流程简述 :在线咨询 - 采样送检 - 付款检测 - 检测分析 - 报告结果
查看详情

相关内容

官方客服团队

为您解决烦忧 - 24小时在线 专业服务