基因工程梅毒筛查技术有效降低检测成本

随着早期梅毒诊断方法的不断发展和完善，为指导临床及时治疗服务的同时，也将更加有效地控制梅毒的蔓延。现阶段实验室有病原学、血清学、基因诊断和CSF等检查方法。但如何加强常用的几类方法对梅毒筛查，日前，全国卫生产业企业管理协会医学检验产业分会秘书长、临床检验医学专家宋海波接受了本报记者的采访。
 
不同的抗体检测具有不同的优点
 
宋海波说，目前国内最常用的梅毒血清学初筛试验是以心磷脂为抗原的非特异性梅毒血清学试验，简称TRUST，中文名称为甲苯胺红不加热血清反应素试验。其所检测的抗体并非抗梅毒螺旋体抗体，而是梅毒螺旋体感染人体以后分解破坏人体组织，其分解产物释放到血液中，使人体产生抗体。分解释放的产物即是心磷脂，所产生的抗体即是反应素。反应素在初期梅毒病灶出现后1～2周就可测出，在二期梅毒滴度最高，三期梅毒较低。这种抗体不具有特异性，除梅毒病人外，一些处于急性期的免疫性疾病（如红斑狼疮等）也可使人体组织受损释放心磷脂到血液中，用该方法有时亦可测出较低滴度的实验阳性反应。这可用确诊试剂简单排除。
 
TP-ELISA是一种通过基因工程经利用梅毒螺旋体多肽抗原包被于反应板的试验。
 
TPHA利用间接血凝法测定人血清或血浆中的梅毒螺旋体的特异性抗体，只要有微量的抗体(血清通常用作1∶80以上稀释)就可使致敏的红细胞发生凝集作用。试验方法中，试剂盒配置的血清吸收剂可消除实验中的生物学假阳性反应，提高试验的特异度。此试验用于确诊梅毒，具有快速、简便、敏感和特异等特点。TPPA原理与TPHA基本相同。TPPA用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏的红细胞，此致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感度，通常用做确诊试验。
 
宋海波说，目前，我国大部分临床检验室对梅毒的血清学检查多采用RPR或TRUST。因TRUST方法操作简便、结果稳定、试剂价格便宜、反应快，不需要特殊仪器设备。所以，已被越来越多的实验室采用。
 
TP-ELISA是检验科的常规操作技术，操作简便，试剂价格比较便宜，适合血站献血者筛查、医院大批量体检和大中型医院检验室对梅毒感染的早期检查，但耗时比TRUST长，需要酶标仪、洗板机。
 
TPPA试剂成本高，检验收费高，操作较烦琐，耗时较长，不适合大量标本的筛查。
 
不同的检测结果具有不同指导意义
 
宋海波说，首先对血站筛查拒绝假阳性献血者，TRUST可用来初步筛查梅毒感染。为了献血者和用血者的身体健康，卫生部给采血机构制定的筛选献血员的各项血液检测标准比医院给病人定的标准要严格得多。另外，各采血机构在试剂盒的选择上，宁可用易出现假阳性检测结果的试剂盒，多筛除一些献血员，也尽可能不让一个真阳性的血液输给受血者。梅毒血清学试验时用TRUST中任何一种检测，结果为阳性的献血者均须筛除，阳性血液全部处理。尤其对孕产妇人群进行筛查梅毒时，可考虑选择用TRUST试验，因有报告显示，现有检出的孕妇梅毒中，隐性感染者占98％。故TRUST的生物学假阳性对血站的献血筛查来说，筛除掉一些非梅毒疾病如感染和免疫性疾病的患者，淘汰部分假阳性的献血者，拒绝其献血，是有益于用血者和献血者的健康和安全用血的。
 
其次，对临床检验诊断具有重要参考价值：TRUST方便测定反应素滴度，反应素在初期梅毒病灶出现后1～2周就可测出，在二期梅毒滴度最高，三期梅毒较低。由于反应素对机体无保护作用，未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性，其滴度变化与梅毒的治疗情况呈正相关，因此适合用于疗效观察、随访和复发的辅助诊断以及基层医院应用，对一些无条件作TPPA、FTA-ABS等梅毒证实试验的医院的医师，在梅毒的诊断上无疑是有很大帮助的。关于生物学假阳性问题，有研究报告显示，所有生物学假阳性反应的TRUST定量试验均≤1∶8，其中91.23%的TRUST定量为1∶2。二期显性梅毒（未经治疗）患者的TRUST定量试验均≥1∶16，其中67.2%的TRUST定量试验≥1∶32。生物学假阳性反应的TRUST定量滴度一般≤1∶8，而未经治疗的二期显发梅毒TRUST定量滴度一般≥1∶16。两者有一个明显的定量滴度不同，这非常有利于临床的鉴别诊断，为临床医师正确判断化验结果提供了一种有利的手段。
 
宋海波认为，TP-ELISA是一种基于基因工程的特异性检测技术，特异性抗体在梅毒的潜伏期（约感染后2周）产生，对二期、潜伏和治疗后梅毒的敏感性和特异性均较高，有研究报告，其对肿瘤、RF、SLE、麻风等标本的检测具有良好的特异性。TP-ELISA其主要缺点是该法检测的是梅毒IgM和IgG的混合抗体，梅毒IgG抗体治愈后相当长的时间内仍然存在较高的阳性率，甚至终身阳性，因此，TP-ELISA阳性只说明正在感染或曾经感染过，不能判断梅毒疾病活动与否，所以不能作为疗效监测手段。故对梅毒的诊断必须结合临床表现，否则，可能导致临床误诊，同时增加患者的不必要治疗、用药和心理负担。
 
TPHA是目前梅毒诊断的确诊试验，一旦试验呈阳性反应后，即使经过治疗，也终身不会转阴。其试剂成本较高,操作较麻烦,且易发生自凝现象和生物学假阳性。TPPA是在TPHA基础上建立的一种新试剂，具有操作简便，不需其他仪器，操作中无需等待血液吸收，2小时读结果的优点，但价格依然昂贵，并且结果判断难以自动化，另外在患者伴硬下疳或生殖器溃疡疑为TP感染时，首次检查可为阴性，需隔1～2周重新复查。
 
总之，梅毒检测方法发展迅速，有针对基层医疗单位的快速、简便的试剂盒，也有针对专门医疗机构，如血站、性病防治机构等每天需要检测大量标本的自动化程度很高的试剂盒。如何做好梅毒初筛，这方面有许多工作要做，寻找敏感、准确、全面的低成本检测方法是工作关键。
（责任编辑：labweb）