目录1.提取出的dna样品好保存在2.
异硫氰酸胍提取DNA
3.
提取的dna浓度一般多少
1.提取出的dna样品好保存在
血液中dna的提取方法(1)将冰冻的血在室温下溶化;(2)取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中,加入等体积的pbs磷酸盐缓冲液,充分混匀后12000rpm离心5min,弃上清;(3)加入667µlste,24µl的20%的sds,37℃水浴1h;(4)加10µl的20mg/ml的蛋白酶k混匀,55℃水浴消化过夜(10~14h);(5)将消化的样品加入等体积的tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;(6)将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;再加入等体积的tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;(7)将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),旋涡振荡至充分混匀,12000rpm离心10min;(8)将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1),充分振荡混匀,12000rpm离心10min;(9)将上清液转移到另一无菌2ml离心管中;加入2倍体积的冰乙醇,1/10体积醋酸钠水平摇动,直到可见絮状dna析出;(10)将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15~20min,取出后再次12000rpm离心10min,使dna沉淀;(11)用枪头将dna挑到另一无菌离心管中,用适量的70%乙醇洗涤并晃动,以洗出dna的杂质;(12)倒出乙醇,将dna用真空干燥或自然晾干,加入适量的te缓冲液回溶,-20℃保存备用。
2.
异硫氰酸胍提取DNA
异硫氰酸胍没有RNA酶和DNA酶活性,可以变性裂解细胞,所以可以用于提取RNA和DNA。
3.
提取的dna浓度一般多少
血清/血浆DNA提取试剂盒浓度跟样本量、洗脱体积有关,一般来说用Qiagen、BIOG方法得率都差不多,50微升洗脱体积可以用Qbit测到5-20ng/ul的读数,浓度稍低也没关系,关键还是看pcr检测结果,毕竟浓度太低测到的读书也没有参考意义,还是要以pcr检测结果为准。