外泌体纯化方法有哪些以及其优缺点

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原标题:外泌体纯化方法有哪些以及其优缺点

外泌体研究自过去二十年以来一直是焦点领域。人体内多种细胞在正常以及病理状态下均可分泌外泌体,如间充质干细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、骨髓细胞、免疫细胞等。外泌体与干细胞有着类似的功能,在组织工程与再生医学方面的临床前期研究,尤其是干细胞外泌体。那么一起来学习一下外泌体纯化方法有哪些以及其优缺点吧!

1. 超速离心法是最常用的外泌体纯化手段,也是普遍认可的一种方式,采用低速离心、高速离心交替进行,可分离到大小相近的囊泡颗粒。
优点:无需特殊试剂,操作简便,适合大批量样本。缺点:耗时耗力,纯度相对较低,回收率不稳定,重复离心会一定程度损伤外泌体,设备要求高。
2. 抗体亲和(磁珠)法利用包被单克隆抗体的磁珠结合外泌体,外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。
优点:纯度较高,特异性和重复性好、操作简便、无设备限制。缺点:效率和回收率较低,仅能捕获表达特定抗原的目标外泌体,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,囊泡完整性影响较大。
3. 微流控指的是使用微管道(尺寸为数微米到数百微米)处理或操纵微小流体(体积为纳升到阿升)的系统所涉及的科学和技术。这种方法具有分离生物颗粒速度快,纯度高,节省样本,集成度高等优点。因此,虽然微流控技术在外泌体分离方面的应用仍处于起步阶段,却已经成为了当前研究的热点。目前,近些年,基于微流控的外泌体分离技术也在不断出现。
4. 尺寸排阻色谱(SEC)是基于尺寸而非分子量分离大分子,尺寸排阻色谱可以精确地分离大分子和小分子。SEC主要用于分离血液和尿液中的外泌体,不过,这种外泌体提取方法需要很长时间,并且不适合处理大量样品。
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