原标题：LabEx推荐—【Cancer Letters】中国科学家外泌体miRNA最新研究！
探究肿瘤微环境中外泌体miRNA的调控作用，对进一步认识肿瘤发生、进展、转移、耐药等过程有着十分重要的意义，并且可作为肿瘤患者早期诊断和预后评价的重要指标。北京大学科学家团队利用nCounter系统深入解析了外泌体miRNA在随母细胞瘤肿瘤微环境中的作用，并提出了潜在的低耐药性治疗方案。该项成果于今年3月发表在《Cancer Letters》杂志上。
Liangyi Zhu, Ying Yang, Haishuang Li, et al. Exosomal microRNAs induce tumor-associated macrophages via PPARγ during tumor progression in SHH medulloblastoma. Cancer Letters, Volume 535, 2022.
https://doi.org/10.1016/j.canlet.2022.215630.
【关键词】: 脑肿瘤；外泌体；microRNA；nCounter；PanCancer IO360 Panel
要点结论
Highlights
体内M2 TAM浸润程度的增加与SHH-MB进展相关；
M2巨噬细胞而非小胶质细胞在SHH-MB中富集；
SHH-MB来源的外泌体miRNAs可以通过PPARγ诱导TAMs的M2极化；
PPARγ拮抗剂可有效提高SMO抑制剂的体内抗肿瘤活性。
研究背景
Background
【髓母细胞瘤（Medulloblastoma, MB）】是儿童最常见的中枢神经系统（CNS）恶性肿瘤，目前主要分为4种具有显著临床特征差异的分子亚型（WNT、SHH、Group 3和Group 4）。其中SHH亚型约占所有MB病例的30%，其特征是SHH通路异常激活，并在肿瘤的发生中起到促进作用。靶向Smoothened 受体（SMO）的抗SHH药物已在临床试验中得到应用。然而，很多研究发现MB患者中出现的广泛的耐药性限制了SMO抑制剂的抗肿瘤疗效。因此，探寻新的治疗策略是长期以来的一个重要课题。最新研究表明，与其他亚群相比，SHH-MB具有显著不同的免疫微环境，即表现出更多的肿瘤相关小胶质细胞/巨噬细胞（tumor-associated microglia/macrophages, TAMs）浸润。然而，TAMs在SHH-MB中所发挥的全面作用仍未得到充分阐释。对SHH-MB中TAMs激活/极化机制及其与肿瘤细胞相互作用的解析，将为发现低耐药性的潜在免疫治疗靶点提供支持。
【外泌体（Exosomes）】是由多泡体与质膜融合时释放到细胞外环境的一种双层膜胞外囊泡（直径约30-150nm），包含复杂 RNA 和蛋白质的，参与细胞间通讯和诸多生理和病理过程。MicroRNAs（miRNAs）和其他生物分子可以通过外泌体在肿瘤细胞和TAMs之间转移，因此外泌体在TAMs极化和肿瘤进展中发挥着关键作用。
既往研究表明，MB来源的外泌体miRNA可在肿瘤细胞间转移，进而影响肿瘤的侵袭能力。然而，目前还没有研究明确外泌体miRNAs是否参与MB进展过程中TAMs的极化。
图1，SHH-MB来源的外泌体miRNAs在TAM M2极化中的作用。GW9662作为一种有效的药物促进Sonidegib治疗。
研究概述
在本研究中，研究人员首先使用NanoString PanCancer IO360 Panel（其中包含770个参与肿瘤发生和IME的基因）分析了48个MB肿瘤患者中4种亚型的免疫微环境（Immuno-microenvironment, IME）表达谱。发现TAMs是SHH-MB亚型的免疫微环境中的主要成分。研究人员进一步区分了肿瘤中的M1/M2巨噬细胞，并发现M2巨噬细胞，而非小胶质细胞在SHH-MB亚型中显著富集。而后在SHH-MB转基因小鼠中，发现M2巨噬细胞与肿瘤进展密切相关。在体外，MB来源的外泌体可以诱导TAMs极化。
然后，研究人员利用RNA测序和荧光素酶试验筛选出SHH-MB来源的外泌体miRNAs及其靶基因，以阐明了这些SHH-MB来源的外泌体miRNAs在肿瘤进展过程中起到调节（激活/极化）巨噬细胞的作用。研究人员发现，let-7i-5p和miR-221-3p的下调可以激活PPARγ上调，进而诱导促进TMAs，而非小胶质细胞的M2极化转变。最后，研究人员在体内证明了PPARγ拮抗剂能有效提高SMO抑制剂的抗肿瘤活性，这一过程和可能和抑制M2巨噬细胞有关。重要的是，与单一SMO抑制剂疗法相比，PPARγ拮抗剂（GW9662）和SMO抑制剂（Sonidegib）的联合治疗可显著降低SHH-MB的进展。该研究结果表明，通过靶向肿瘤来源的外泌体miRNAs来抑制TAMs极化途径，可以提高SHH-MB亚型SMO抑制剂的治疗疗效，为SHH-MB提供了一种潜在的治疗策略。
nCounter流程
Workflow
，时长
02:30
相比于NGS和基于PCR的表达检测方法，nCounter搭配的检测Panel可以满足同时对~800个靶标（DNA、RNA或蛋白质）的定量检测，从样本到分析结果的整体工作流程仅需不到1.5天时间（包含15分钟总的手动操作时间），不需要PCR扩增、反转录和文库构建等步骤。后续衔接免费的nSolver软件，可以实现快速、简单、直观的数据分析。该方案具备全面的样本兼容性，可支持的样本包括Total RNA、FFPE、细胞裂解液、PBMC、血浆、血清等。目前基于nCounter平台的定量技术已有超过5000篇科研文献的发表。
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高度自动化的设计流畅衔接下游分析软件，更易于操作者使用，样本就绪项目即刻开启。
Step 1: 杂交
两个探针直接与目标分子杂交结合：Reporter 探针带有荧光条形码（barcode），Capture 探针与目标分子紧密结合。
Step 2: 纯化+固定
杂交完成后，样本转移至nCounter并去除多余探针进行纯化。纯化后的靶标-探针复合体会被固定，并按照一定的方向排布。
Step 3: 计数定量
荧光显微成像系统完成自动扫描。每个靶标分子结合的barcode会被捕获计数，并记录至CSV文件中导出。返回搜狐，查看更多
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